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kristanko
Utente Junior
Città: Bologna
123 Messaggi |
 Inserito il - 31 maggio 2010 : 10:24:24
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Ragazzi/e, sono un ignorante di prima categoria. Vi prego Help me!!
Come posso fare delle curve di crescita cellulari? Ho sentito diverse voci, ma tutte stridenti fra di loro e non sono in possesso di un protocollo unico.. Considerate che devo verificare la crescita di cellule trattate rispetto al controllo.
Grazie a chi risponderà
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6940 Messaggi |
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kristanko
Utente Junior
Città: Bologna
123 Messaggi |
Inserito il - 31 maggio 2010 : 10:40:40
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è qui il problema...
contarle dopo 24 ore significa perdere quella fiasca giusto? Mica posso contare e risospendere quelle stesse che ho contato. Quindi per ogni step di conta e ogni trattamento devo prevedere una fiasca in partenza... giusto?
Per essere più pignoli, Mettiamo che ho: CNTR e TRATTAMENTO. E che devo contare dopo 12, 24, 48, 72.
Io in partenza devo avere otto fiasche, quattro per CNTR e quattro per TRATTAMENTO. E' questo che non mi è chiaro... |
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 31 maggio 2010 : 11:06:47
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| mica devi usare tutta la fiasca per contare le cellule! Anche perchè sennò non finiresti più! in genere quello che si fa è prendere una aliquota dalla tua fiasca, per esempio a 24 ore, la pipetti per benino su una camera di burker e poi conti. Dal risultato che ottieni risali al numero di cellule per ml |
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kristanko
Utente Junior
Città: Bologna
123 Messaggi |
Inserito il - 31 maggio 2010 : 11:12:15
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| per prendere tale aliquota da contare, devo comunque tripsinizzare TUTTA la fiasca... e poi le altre cellule le ripiastro? E continuo con quella fiasca per le conte successive? Non mi sembra molto attendibile come curva in questo modo perchè le cellule vengono tutti i giorni staccate ri piastrate, staccate e ri piastrate... che attendibilità otterrei? Non alta credo... |
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6940 Messaggi |
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kristanko
Utente Junior
Città: Bologna
123 Messaggi |
Inserito il - 31 maggio 2010 : 11:32:41
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| no... in teoria per 24 ore. Perchè ci mettono 24 ore ad aderire alla fiasca...quindi dopo 48 ore, ad esempio, tripsina, risospendo, centrifugo, recupero, risospendo in terreno fresco, conto e ripiastro. Da questo momento prima che le cellule aderiscano devono passare 24 ore... e poi? Quando conto per le 72 ore?? |
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6940 Messaggi |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 31 maggio 2010 : 11:48:55
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ma non puoi partire da supporti più piccoli? che so, anche una 6 well andrebbe bene. così hai la tua piastra ctrl e la tua piastra trattamento. semini in 4 pozzetti, al giorno 1, la stessa quantità di cellule di partenza e ogni 24 ore ti stacchi un solo pozzetto, te le conti e annoti. gli altri pozzetti ti serviranno per le conte dei giorni dopo. sprecheresti meno materiale ed eviteresti di tripsinizzare ogni giorno (che magari poi fa anche male alle tue cellule). ovvio che questa cosa la puoi fare anche in fiasca, ma sprecheresti tante fiashe e tanto terreno.
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...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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kristanko
Utente Junior
Città: Bologna
123 Messaggi |
Inserito il - 01 giugno 2010 : 09:28:02
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| Giusto Iside! Bel consiglio!! Era quello che intendevo infatti.. benebenebene.. vedo subito se è attuabile! E sopratutto "running over the same old ground, what have we found?" |
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Discussione |
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curve di crescita 
