RT PCR errore nella denaturazione dell'RNA

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Discussione

kateryna
Nuovo Arrivato

Prov.: rm
Città: roma

2 Messaggi

Inserito il - 01 giugno 2010 : 18:11:42

Ciao a tutti!
qualcuno mi saprebbe dire cosa succede se invece di denaturare l'RNA a 65°C 5 minuti, prima della retrotrascrizione, lo denaturo a 95 °C per 5 minuti?.....ho commesso un errore nell'impostazione del ciclo termici ed ho denaturato a 95°C! La retrotrascrittasi l'ho aggiunta dopo, dopo aver messo 2 minuti i campioni in ghiaccio, per cui quello che mi preme sapere e se nella denaturazione posso aver rovinato il mio mRNA....che dovevo retrotrascrivere!
grazie a chiunque mi risponda!

Gabry
Nuovo Arrivato

Prov.: Ancona
Città: santa maria nuova

64 Messaggi

Inserito il - 03 giugno 2010 : 13:01:38

Beh di sicuro 95°C all'RNA bene non fa... la prova del nove la puoi avere solamente una volta fatta la realtime o in qualsiasi modo tu voglia identificare il tuo mRNA.

SpemannOrganizer
Utente

Città: Los Angeles

955 Messaggi

Inserito il - 03 giugno 2010 : 15:01:00

RNA totale? Se ne hai la possibilità, corri un aliquota dell'RNA riscaldato su gel... se è ancora in buone condizioni dovresti vedere le 2 o tre bande S (se nn ricordo male 30S, 16S e 5S se è proprio perfetto)

kateryna
Nuovo Arrivato

Prov.: rm
Città: roma

2 Messaggi

Inserito il - 04 giugno 2010 : 23:28:57

Grazie a tutti, in realtà ho semplicemente mandato la retrotrascrizione ed ho verificato la bontà della mia estrazione con un house keaping!....è andato tutto bene......
grazie ancora!