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Dr.Acid
Nuovo Arrivato



13 Messaggi

Inserito il - 08 giugno 2010 : 19:49:06  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dr.Acid Invia a Dr.Acid un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
SAlve a tutti volevo sapere se qualcuno poteva aiutarmi nel calcolarmi questi parametri che sinceramente a lezione non ho capito bene come fare :D graziee

Miscela per un volume totale di 50 µl



CONC.INIZIALe......................CONC. FINALE .........VOL.PER 1CAMP.	

Buffer (10X)..........................1X		
dNTPs (10 mM).........................0,4 mM 
		
MgCl2 (50Mm)..........................2.5 mM
		
Primer forward(20 pmol/µl)............0,4 pmol/µl
		
Primer reverse  (20 pmol/µl)..........0,4 pmol/µl
		
TAQ Polymerase 5U/ul...................2 units
		
DNA 0,1mg/ml............................50 ng
		
H2O sterile................... s.q. portare a volume



E' una tabella dovrei trovarmi il volume per 1 solo campione , se qualcuno riesce a spiegarmelo ve ne sarei grato.. grazieeee :D

Stefy84
Nuovo Arrivato

dna



64 Messaggi

Inserito il - 08 giugno 2010 : 20:43:11  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Stefy84 Invia a Stefy84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Per ogni componente da aggiungere alla mix per la pcr devi calcolare il fattore di diluizione, vale a dire auante volte deve essere diluito per ottenere la concentrazione finale. fatto questo devi calcolare la quantitĂ  da mettere nel volume finale di 50ul per rispettare la diluizione.
ti faccio un esempio:
il buffer è un 10x, la sua concentrazione finale deve essere 1x, vale a dire che lo devi diluire 10 volte. Per diluirlo 10 volte nella mix di 50ul è necessario aggiunge (50/10) 5 ul di buffer.
Lo stesso ragionamento deve essere fatto per tutti gli altri componenti ad eccezione della Taq e del DNA per i quali devi calcolare quanti ul sono necessari ad avere le quantitĂ  richieste. Ad esempio per la Taq devi calcolare quanti ul contengono 2 U ( 5U:1ul=2U:x ).
Spero di essere stata chiara nella spiegazione.
Stefania
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Morfeo
Nuovo Arrivato

Cittŕ: Roma


110 Messaggi

Inserito il - 08 giugno 2010 : 21:35:47  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Morfeo Invia a Morfeo un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da Stefy84

Per ogni componente da aggiungere alla mix per la pcr devi calcolare il fattore di diluizione, vale a dire auante volte deve essere diluito per ottenere la concentrazione finale. fatto questo devi calcolare la quantitĂ  da mettere nel volume finale di 50ul per rispettare la diluizione.
ti faccio un esempio:
il buffer è un 10x, la sua concentrazione finale deve essere 1x, vale a dire che lo devi diluire 10 volte. Per diluirlo 10 volte nella mix di 50ul è necessario aggiunge (50/10) 5 ul di buffer.
Lo stesso ragionamento deve essere fatto per tutti gli altri componenti ad eccezione della Taq e del DNA per i quali devi calcolare quanti ul sono necessari ad avere le quantitĂ  richieste. Ad esempio per la Taq devi calcolare quanti ul contengono 2 U ( 5U:1ul=2U:x ).
Spero di essere stata chiara nella spiegazione.
Stefania


Esattamente ad esempio quanto č piů concentrata la soluzione madre dell'MgCl2 rispetto alla tua concentrazione finale? e quanto devi diluirlo? Il segreto per capire queste cose č immaginarsi proprio cosa vai a fare quando prepari i campioni.
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Dr.Acid
Nuovo Arrivato



13 Messaggi

Inserito il - 09 giugno 2010 : 01:29:02  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dr.Acid Invia a Dr.Acid un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie.. credo di aver capito :D grazieeeee!
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chick80
Moderatore

DNA

Cittŕ: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 09 giugno 2010 : 08:31:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Dai anche un occhio a queste pagine: http://www.molecularlab.it/principi/calcoli-laboratorio/

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