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Autore Discussione  

cristiano
Nuovo Arrivato


Prov.: Novara
Cittā: novara


37 Messaggi
Inserito il - 02 agosto 2006 : 13:38:51  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di cristiano Invia a cristiano un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
salve a tutti, devo fare uno studio di espressione, ho il mio RNA totale quantificato e una real time. A questo punto mi consigliate di usare una semplice retrotrascrittasi che usa oligo(dT) per il primo strand, random primer per il secondo e poi partire con la real time con primer specifici per il mio gene, oppure usare i kit one-step e sbattere direttamente tutto in real time?
grazie!
CRI

chick80
Moderatore

DNA

Cittā: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 02 agosto 2006 : 22:08:28  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Io ti consiglierei di fare prima una RT-PCR e poi la real time, almeno hai piu' controllo sui vari step del processo.... ma cmq i due metodi dovrebbero (almeno in teoria) essere equivalenti!
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AC
Nuovo Arrivato



45 Messaggi
Inserito il - 02 agosto 2006 : 22:10:34  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di AC Invia a AC un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao
dipende dal tipo di studio che devi fare.
Con una two step ottieni prima il cDNA poi questo viene usato in real time con primer specifici. Il vantaggio rispetto alla one step č che una volta ottenuto il cDNA puoi usarlo per diversi studi. invece con la one step l'RNA viene messo nella mix di reazione, retrotrascritto e amplificato nello stesso tubo, hai il vantaggio di ridurre i passaggi e/o eventuali errori manuali, ma il cDNA viene impiegato solo per quella reazione.

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cin
Utente Junior

ptero

Prov.: Padova
Cittā: Padova


558 Messaggi
Inserito il - 03 agosto 2006 : 12:46:23  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di cin Invia a cin un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Noi facciamo sempre e solo two step.
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