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netbridge85
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 Inserito il - 27 giugno 2010 : 14:20:47
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Ciao a tutti ho un quesito da porvi....sto studiando genetica II e in particolare lo screening di una library genomica. Ad un certo punto mi sono inceppata su un punto: poniamo che devo studiare un gene, di cui voglio sapere qual è la sequenza, quindi io ho fatto la mia banca di cloni in un vettore, ciascuno contenente un frammento diverso di DNA. Uso a questo punto una probe X per riconoscere il clone con il frammento di DNA che mi interessa. Ma a questo punto la mia probe si attacca a 3 cloni differenti, e ciò si suppone voglia dire che gli inserti dei cloni evidenziati siano in realtà lo stesso inserto, ma ridondante. Allora la mia prof dice: digeriamo i 3 cloni con diversi enzimi di restrizione e costruiamo un pattern di restrizione (mediante elettroforesi su gel di agarosio) con il quale individuiamo l'ordine dei frammenti (o forse per capire se sono uguali o meno??). Quello che non ho capito è come faccio a capire che sono uguali o diversi in funzione delle distanze tra i siti di restrizione? ho trovato un pdf su internet che spiega con uno schema il concetto (pag 46 e 48) --> http://geneticamedica.uniss.it/lavori/lezioni/Fare%20solo%20la%20PCR%20-%2012.Tecnologie%20per%20la%20clonazione%20del%20DNA%20ricombinante.pdf
ma non capisco ancora: nella parte finale dello schema a pag 46 dice che si individuano due modelli A e B, ma in funzione di che cosa esclude il modello A? so che è una questione di logica, ma non ci arrivo...potete aiutarmi a capire?
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Se ti tramuti in qualcosa di più di un semplice uomo, se consacri te stesso a un ideale e se nessuno riesce a fermarti allora diventerai una leggenda! |
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Parauallr
Nuovo Arrivato
Città: Nocera Inf. (SA) - Roma
92 Messaggi |
 Inserito il - 28 giugno 2010 : 08:32:26
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| E' semplice. Lo capisci dalla digestione di entrambi gli enzimi. Infatti questa digestione produce tre segmenti di 2.5, 2.0 e 0.5 Kb. Se osservi bene, nel modello A la doppia digestione formerebbe frammenti di 0.5, 1.5 e 3.0 Kb. |
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netbridge85
Nuovo Arrivato
Prov.: Milano
Città: Milano
79 Messaggi |
Inserito il - 29 giugno 2010 : 16:02:47
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| Si ok ma nel caso di cui ho parlato sopra la domanda? non c'è nessuno che l'ha fatto in laboratorio? o anche farmi un es? Grazie cmq per la risposta |
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Pattern di restrizione e cloni positivi
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