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Zagami
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 Inserito il - 22 novembre 2018 : 17:22:05
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Cara lisa81
Proprio oggi mi sono iscritto al sito è trovando la tua questione sulle modalità di misurare gli enzimi cardiaci, ti propongo un metodo da me realizzato nel passato riguardante l'HBDH, spero ti sia ancora utile
#945;-Hydroxybutyrate dehydrogenase(HBDH)
Reagenti
R1: dissolvere in tampone Tris-HCl 50 mM a pH 7.25 ± 0.25 (in un beaker, immerso in acqua fredda, contenente 80 ml di dH2O, dissolvere 0.605 g di Tris aggiustare il pH a 7.4 aggiungendo lentamente circa 0.3 – 0.35 ml di HCl 37% conc., mescolando in continuo, controllare il pH a temperature ambiente e portare a volume di 100 ml con dH2O), 5.6 mM (0.7 g/L) sodium 2-oxobutyrate (Fluka cod 75825), 2.2 mM (0.82 g/L) disodium ethylenediamine tetraacetic acid diidrato, 2.0 mM (0.15 g/L) NaN3, 1.5 g/L sucrose, 2.0 g/L mannitol, 0.5 g/L BSA, 12.0 mM (7 g/L) Triton X-100 (surfactante non ionico).
R2: dissolvere in tampone Tris-HCl 50 mM a pH 7.25 ± 0.25 (come sopra), 1 mM (0.71 g/L) #946;-Nicotinamide Adenina dinucleotide ridotta sale disodico xH2O (NADH – Fluka cod. 43420), 2 mM (0.15 g/L) NaN3, 3.5 mM (2.7 g/L) L-#945;-phosphatidylcholine sodium salt from chicken egg, 0.2 mM (0.04 g/L) MgCl2•6H2O, 12 mM (7 g/L) Triton X-10.
Procedura
Nei pozzetti a U di una micropistra dispensare 240 µl di R1 riscaldare a 37 °C per 1 min. e quindi dispensare 6 µl di siero, mescolare e incubare per 1 – 2 min. a 37 °C, alla fine del quale pipettare 60 µl di R2 preriscandato a 37 °C. Leggere l’Abs a 340 nm per 3 min. rilevando l’Abs ogni min. al fine di porter calcolare la #916;Abs/min., il cui valore va moltiplicato per il fattore ottenuto processando un calibratore nelle medesime condizioni operative.
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dosaggio enzimi nell'infarto del miocardio
Didattica
