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idaxxx
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
 Inserito il - 26 agosto 2006 : 15:23:49
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hola a tutti,
mi potete indicare le tecniche sullo studio della proteomica magari anche le ultimissime..grazie mille
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
 Inserito il - 27 agosto 2006 : 00:58:21
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Beh, ce ne sono tantissime.
La prima cosa che puoi fare sono i dosaggi proteici, dal semplicissimo Comassie blue per vedere quante proteine ci sono nel tuo campione a cose più sensibili come l'ELISA o saggi specifici per un certo enzima.
Dopodichè forse la tecnica più classica è il western blotting che in sostanza consiste nel far correre le proteine su di un gel, trasferirle su di una membrana di nitrocellulosa che poi viene incubata con l'opportuno anticorpo, poi rilevato con una foto. Si possono anche fare gel 2D: in questo caso fai correre il gel in un verso e poi nell'altro; se crei un gradiente di pH da uno dei due lati puoi separare lì per punto isoelettrico e dall'altro lato per massa.
La proteina isolata può poi essere purificata dal gel e analizzata con spettroscopia di massa (MS), risonanza magnetica nucleare (NMR), cristallografia a raggi X e chi più ne ha più ne metta 
Si possono inoltre fare esperimenti ex-vivo su fettine di tessuto o su cellule in coltura utilizzando rispettivamente l'immunoistochimica (IHC) o l'immunocitochimica (IIC) che essenzialmente funzionano incubando il tuo tessuto/cellule fissato ad es. con parafolmaldeide con un anticorpo per il peptide di interesse. Si usa poi uno anticorpo secondario marcato in qualche modo (es. fluorescenza o perossidasi) per rilevare il primo e poi al microscopio puoi vedere le cellule positive.
E' anche possibile mettere più di un anticorpo primario per rilevare più peptidi contemporaneamente, a patto che siano fatti in specie diverse in modo da poter usare anticorpi secondari diversi e marcati diversamente.
Tecniche molto più avanzate sono poi l'immuno-PCR e l'IDAT che combinano la rilevazione con anticorpi alla PCR e permettono di quantificare il contenuto proteico anche di una singola cellula.
Sicuramente avrò dimenticato molte tecniche, ma come vedi ce ne sono veramente tante!
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idaxxx
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
 Inserito il - 27 agosto 2006 : 15:02:06
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grazie mille ,
potresti indicarmi qualche sito dove poter approfondire queste tecniche?sono un po'in crisi 
devo scivere un tema:"Tecniche classiche e innovative per lo studio del proteoma" e non so da dove cominciare....grazie |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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idaxxx
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
Inserito il - 29 agosto 2006 : 15:46:26
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grazie mille..
ma come tecniche classiche che mi consigli di descrivere?
scusami ma non sono pratica del campo... |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 29 agosto 2006 : 22:18:07
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Guarda, stando sulle tecniche classiche io parlerei del Western blotting, ELISA e IIC/IHC.
Sono tre approcci diversi alla misura delle proteine e sono tra i più usati. |
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idaxxx
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
Inserito il - 30 agosto 2006 : 14:14:42
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ciao grazie per i tuoi preziosi suggerimenti
potresti consigliarmi anche quali tecniche innovative descrivere?
grazie ancora
a presto |
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Fil23
Utente Junior
Prov.: estero
Città: London
238 Messaggi |
Inserito il - 30 agosto 2006 : 15:20:02
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Ciao,
tecniche classiche sicuramente l'elettroforesi, la prima e storica, poi il sequenziamento chimico e il sequenziatore.
Io invece come tecniche innovative metterei quelle che fanno uso di anticorpi poli e monoclonali (piuttosto recenti), l'array, la spettrometria, la spettroscopia NMR per biomolecole è piuttosto recente (la tecnica è vecchia ma prima era solo per chimici), la crio-elettro-tomografia e tecniche simili di microsopia elettronica con risulizione massima a 10A (per lo studio morfologico di aggregati proteici di grosse dimensioni), sicuramente la + recente e innovativa è la bioinformatica (ORF, predizione di struttura e di funzione)....ora nn mi viene in mente altro...ma son tante davvero.
buon lavoro
ciao ciao |
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NINA7
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: NAPOLI
1 Messaggi |
Inserito il - 22 settembre 2006 : 20:30:06
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| ciao a tutti mi sono appena iscritta spero di darvi poco fastidio. a presto. baci |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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nuove tecniche per proteomica
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