Salve a tutti! Devo effettuare dei saggi per valutare la capacità inibitoria di alcune molecole nei confronti di una proteasi (anthrax lethal factor). Questo saggio viene condotto untilizzando lo spettrofotometro per monitorare la diminuzione dell'assorbimento a 405 nm (dovuto alla formazione del prodotto)a seguito dell'aggiunta dell'inibitore. Nella miscela di reazione sarà presente l'enzima, il substrato e quantità crescenti di ininbitore. Il problema che mi si presenta è il seguente:preparo il tutto in un eppendorf e prima di trasferirlo nella cuvetta aggiungo l'enzima.Dopodichè inizio la lettura a 405 nm. Nei primi secondi si verifica sempe una diminuzione dell'assorbimento, così la curva presenta sempre un'avvallamento iniziale!Non capisco da cosa dipenda..forse è un problema di omogeneità della soluzione di reazione oppure di concentrazioni? un grazie a chiunque possa darmi un'idea in più!