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folli
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
 Inserito il - 10 settembre 2010 : 22:17:22
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ciao a tutti!
Potreste aiutarmi con questa "sciocchezza"?
Ho estratto RNA da due campioni di fegato. Dunque:
Il primo campione ha una concentrazione di 241,44 ug/ul e
il secondo campione ha una concentrazione 319,07 ug/ul entrambi di un volume finale di 30 ul.
Ora per ottenere i ug ho fatto:
Concentrazione x Volume Fiale / 1000 = 1,4 ug e 2,5 ug rispettivamente.
Il mio problema (sciocco lo so) è che devo miscelare 1 ug del primo e 1 ug del secondo per fare sintesi di cRNA.. ma a questo punto, quanti ul dovrei prelevare per avere un microgrammo di ogni campione?
Grazie :)
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 10 settembre 2010 : 23:22:05
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mmmm sento odore di microarray (affymetrx?)... Credo che tu abbia sbagliato a riportare le conc iniziali: semmai saranno 241 ug/ml non su ul.
Ad ogni modo, potresti venirne a capo con questa semplice proporzione: hai 1,4 ug su 30 ul, ne vuoi 1 ug, quindi ---> 1,4:30 = 1:X -----> 21,4 ul circa. Ci sono diversi modi di ragionare, l'importante è scegliere quello che ti rimane + semplice e immediato.
Fai lo stesso lavoro per l'altro.
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folli
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 10 settembre 2010 : 23:47:11
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Grazie per la veloce risposta!
Cmq le concentrazioni sono giuste.
In pratica ho estratto RNA e ho nanodroppato 1 ul di campione e le concetranzioni, come scritto prima, sono le seguenti:
Il primo campione ha una concentrazione di 241,44 ug/ul e
il secondo campione ha una concentrazione 319,07 ug/ul
entrambi hanno un volume totale di 30 ul
Ora mi sono accorta che ho sbagliato a riportare il risultato e quello giusto è quanto segue:
Concentrazione x Volume Fiale / 1000 = 7,2 e 9,6 ug rispettivamente
Dunque se ho capito bene 1) 7,2 :30 = 1 : x e 2) 9,6:30=1:x
x= 4,16 ul di campione 1 + x=3,12 ul campione 2
Giusto no?
Quindi il mio campione 1+2 ha volume finale di 7,28 ul
In pratica il mio prof mia ha chiesto di fare un mix del campione 1 e 2 che provengono da uno stesso trattamento. Il passo successivo è il labeling con Agilent Kit one colour.
DOMANDA:
Dovrò nanodroppare di nuovo il campione finale (1+2) e da questa concentrazione finale impostare il set up sheet per il labeling????
grazie pe rle preziose info, mi stai aiutando tantissimo :) |
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 11 settembre 2010 : 10:33:48
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I calcoli sembrerebbero giusti, ma quello che nn mi torna è la conc. iniziale. Credo infatti che i valori che tu ha riportato dal nanodrop siano in ng/ul (nanogrammi su microlitro). L'uso della u sta ad indicare microgrammi! Quindi fai attenzione a come scrivi le unità di misura, tutto qui. Per il resto direi che va bene
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zerhos
Utente Junior
Prov.: Pisa
Città: Pisa
421 Messaggi |
Inserito il - 11 settembre 2010 : 21:30:14
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si infatti sono nanogrammi/microlitro
i conti tornano:
241 ng/ul------> 0,241 ug/ul;
0,241 x 30 =7,23 ug/ul;
meno male,in genere le mie estrazioni di RNA sono misere,se te ne estraevi davvero così tanto,attiravi tutte le mie invidie :P |
"l'unica differenza tra me e un pazzo è che io non sono pazzo!"
Salvador.Dalì
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folli
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 12 settembre 2010 : 05:25:14
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Si scusate..non avevo fatto caso; ho sbagliato a scrivere.. le concentrazioni sono ng/ul.
Grazie per l'aiuto!!
ultima domanda..
Suppongo che una voUno volta ottenuto il mix dei due campioni dovrò nanodroppare di nuovo per valutare la nuova concentrazione del nuovo campione, prima di fare qualsiasi cosa (microarray compreso..) giusto??
graziee |
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crisi
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
Inserito il - 12 settembre 2010 : 19:38:08
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| so che qui si parla di RNA ma non ho trovato un link utile...qlc saprebbe spiegarmi in parole povere il protocollo della lisi alcalina modificato per piccoli volumi di sambrook?!?!?!?!grazie |
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Estrazione RNA e mix dei campioni per Labeling
Didattica
