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sagittarius
Nuovo Arrivato
10 Messaggi |
 Inserito il - 19 ottobre 2010 : 18:29:40
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ciao a tutti!sono nuovo di qui,ma credo di aver trovato il posto giusto per ricevere risposta alle mie domande,spero! :)
allora,nel lab di farmacologia dove sto facendo esperimenti per la mia tesi ci troviamo attualmente a dover trasfettare delle colture cellulari con siRNA per vedere il coinvolgimento di una certa proteina nella dendritogenesi.
Il mio dubbio è:perchè dobbiamo utilizzare 4 diversi siRNA per inibire l'espressione di un unico gene?cioè,nota la sequenza,non basterebbe disegnare un unico siRNA che vada a degradarne il messaggero corrispondente?
grazie già in anticipo delle risposte e perdonate l'ignoranza,ma è praticamente la mia prima esperienza seria in lab! :)
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2010 : 20:02:13
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| possibile che vi siano isoforme diverse dello stesso gene (splicing alternativi?)... Sinceramente dubito che utilizziate 4 diversi costrutti per aumentare la specificità su un unico target... |
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sagittarius
Nuovo Arrivato
10 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2010 : 20:17:10
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| in realtà noi abbiamo testato i 4 diversi siRNA e poi x i successivi esperimenti ne abbiamo scelto solo uno..quindi dici ke inizialmente ne abbiamo utilizzati 4 x la possibilità di isoforme del gene e poi,individuato quello più efficiente,abbiamo deciso di proseguire con questo? |
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2010 : 20:21:54
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| no in questo caso cambia tutto. dal tuo post sembrava che li utilizzassi tutti e 4 insieme. Ne avete testati 4 semplicemente per vedere quale elimina in maniera più efficace il tuo mRNA e lo fa con minor numero di off-targets (aspecifici) |
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kORdA
Utente Attivo
Prov.: Milano
Città: Monza
1303 Messaggi |
Inserito il - 20 ottobre 2010 : 09:39:35
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| Tieni conto che, a prescindere dalla complementarieta' di sequenza tra siRNA e responsive element sul target, esistono altri numerosi fattori di contesto tali per cui un sito e' piu' efficace di un altro (es.: posizione del sito lungo la sequenza, regioni fiancheggianti che potrebbero limitarne l'accessibilita', ecc.). Di conseguenza, anche se i quattro siRNA sulla carta avrebbero la stessa efficacia, non e' detto che reprimano allo stesso modo. |
http://www.linkedin.com/in/dariocorrada |
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sagittarius
Nuovo Arrivato
10 Messaggi |
Inserito il - 20 ottobre 2010 : 15:36:05
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| grazie tanto!!ora tutto mi è più chiaro! :) |
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Discussione |
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esperimento con siRNA:dubbio!
Didattica
