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alessandro gori
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
 Inserito il - 28 novembre 2010 : 09:39:52
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Ho una domanda da fare che forse può sembrare ovvia per molti ma non per me.
Ho un inserto da clonare con i siti di restrizione n-terminale BglII e c-terminale BamHI. Ora il plasmide che devo utilizzare presenta graficamente nel foglio delle istruzioni questi siti ma invertiti cioè prima viene il BamHI e poi il BglII . Ora posso clonare il mio gene così oppure mi troverò il gene invertito e quindi impossibilitato a trascrivere la sequenza?
Ringrazio anticipatamente per la gentile collaborazione.
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1915 Messaggi |
Inserito il - 28 novembre 2010 : 10:11:52
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| Ma perche' non disegni dei primers che ti permettano di clonare nel modo corretto? di trascrivere lo trascrivi... il problema nasce nella traduzione , e poi che te ne fai di un trascritto revertato ? |
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 28 novembre 2010 : 11:57:06
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| Ti trascriveresti un antisenso...buono per le ibridazioni in situ :). Se hai un promotore anche dall'altra parte che ti possa trascrivere il filamento senso bene, altrimenti scegli altri siti di restrizione come ti ha suggerito Patrizio. |
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alessandro gori
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
Inserito il - 29 novembre 2010 : 11:38:45
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Ok era come pensavo. Seguo il vostro consiglio.
Grazie per la collaborazione. ALe |
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RM
Nuovo Arrivato
115 Messaggi |
Inserito il - 29 novembre 2010 : 11:44:35
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Volendo potresti farlo. Se non ricordo male Bgl2 e bamh1 hanno estremità compatibili. Tenendo presente che così però non sarà più un clonaggio direzionale
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 29 novembre 2010 : 13:11:27
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| Non mi pare che BglII e BamHI abbiano estremità compatibili. |
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RM
Nuovo Arrivato
115 Messaggi |
Inserito il - 29 novembre 2010 : 14:08:46
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A me sembra di sì:
BamH1:
G / G A T C C
C C T A G / G
5´ - GATC
BglII:
A / G A T C T
T C T A G / A
5´ - GATC |
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 29 novembre 2010 : 14:23:31
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hai ragione! sono isocaudomeri. Pardon  |
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Problema di Clonaggio
Didattica
