Allora, traduzione:
Sono state generate e sequenziate delle delezioni unidirezionali annidate dell'inserto del subclone tramite digestione con esonucleasi III.
La sequenza a monte del sito TaqI 59 è stata ottenuta tramite PCR della sequenza ricombinante di DNA di fago, con un primer per il promotore T3 nel vettore virale e un primer specifico per AFGP. Questa sequenza (quella a monte di TaqI 59) è stata clonata in un vettore pCRII e sequenziata.
Spiegazione:
Non avendo letto l'articolo non sono sicurissimo... però direi che hanno preso i frammenti positivi e hanno fatto delle delezioni nested unidirezionali, cioè hanno digerito il frammento solo da un lato lasciando la reazione per tempi diversi.
Quindi avrai qualcosa tipo:
5'------------------3' frammento intero
5'-------------3' ..
5'--------3' ..
... ..
5'--3' frammenti sempre più corti da un'estremità
Questo probabilmente gli sarà servito per vedere quali regioni del gene sono importanti per una sua certa funzione. Es. se il gene è lungo 500bp e tu togli 10bp alla volta e vedi attività se ne togli 10, 20 e 30 ma non più di 40 puoi dire che la sequenza fra 30 e 40 è necessaria per quell'attività.
La seconda frase invece dice che hanno clonato un frammento a monte di un certo sito di restrizione (TaqI) che probabilmente gli serviva ma non era compreso nei cloni qui sopra.
Per fare questo hanno usato un primer per il promotore di T3, in cui suppongo abbiano clonato le sequenze e uno su EFGP che evidentemente è a valle del sito TaqI.
La situazione sarà stata tipo (EFGP potrebbe essere prima o dopo il clone, non so):
primer1 primer 2
------> <-----
----[promotore T3]-------[FRAMMENTO INTERESSANTE]--|------[clone]---[ EFGP ]------
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sito TaqI