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DanyD
Nuovo Arrivato

35 Messaggi

Inserito il - 03 febbraio 2011 : 14:30:18

Salve ragazzi ho un dubbio: perch� quando inserisco un plasmide in una cellula batterica per trasformazione, essa non lo taglia con gli enzimi di restrizione? Forse il DNA � gi� stato metilato in precedenza?

Studiando ho letto che gli enzimi di restrizione spesso metilano prima di tagliare, dal momento che per inserire il mio gene nel plasmide, uso un enzima di restrizione, � possibile che nel tagliare, l'enzima metili anche alcune sequenze del plasmide?

Grazie per l'aiuto!

Patrizio
Moderatore

Citt�: Barcellona

1914 Messaggi

Inserito il - 03 febbraio 2011 : 14:46:17

scusa ma in una reazione che tu imposti, dove dovrebbe andare a prenderlo il gruppo metilico l'enzima?
tuttavia se leggi il catalogo degli enzimi, cerca il tuo e vedi se ci sono delle "restrizioni"

usando cellule batteriche, in genere puo' succedere che un enzima non tagli un DNA metilato ad esempio nelle isole CpG

DanyD
Nuovo Arrivato

35 Messaggi

Inserito il - 03 febbraio 2011 : 14:51:01

Ciao Patrizio, purtroppo io sono ancora sui banchi di scuola e non posseggo alcun catalogo. :D
Hai ragione, in effetti il gruppo metilico dove lo pescano?

Per� non ho ancora capito bene, quindi i plasmidi forniti sono gi� stati metilati su alcune isole CpG? E ci� fa s� che il batterio riconosca il DNA come "proprio" e lo includa senza tagliarlo?