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patty82
Nuovo Arrivato
31 Messaggi |
 Inserito il - 23 febbraio 2011 : 10:41:59
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Buongiorno ragazzi mi è venuto un dubbio: quante ore dure l'overnight?
Perchè devo digerire del DNA genomico con due enzimi di restrizione (HpaII e HhaI)che devono lavorare overnight e a volte, con alcuni DNA, non riesco a digerire. Io li tengo 16 ore e 30 minuti ma a questo punto mi viene il dubbio che sia troppo poco.
Mi sapete aiutare?
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1915 Messaggi |
Inserito il - 23 febbraio 2011 : 11:39:25
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mi viene da chiederti perchè devi fare ciò, controlla se questi enzimi hanno dei limiti sul genomico
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 23 febbraio 2011 : 11:47:48
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| Ciao anche io ho fatto delle digestioni di genomico overnight, per fare delle linker-mediated pcr. 16 ore dovrebbero essere sufficienti, tuttavia anche io non sempre osservo una completa digestione del DNA. Quanto DNA metti nella digestione? Forse se diminuisci un po' la quantità di DNA? |
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patty82
Nuovo Arrivato
31 Messaggi |
Inserito il - 23 febbraio 2011 : 13:42:48
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| Allora inizialmente usavo 25 ng di DNA, poi per alcuni motivi ho aumentato drasticamente a 250 ng ma il porblema l'ho adesso come l'avevo prima.... |
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 23 febbraio 2011 : 14:15:56
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| uhm dunque nn è quello il problema... domanda, non è che ti si son scassati semplicemente gli enzimi? hai provato a fare delle digestioni di prova con controlli positivi (plasmidi con i siti di restrizione richiesti)? |
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Didattica
