dosaggio del citocromo c

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NAB
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19 Messaggi

Inserito il - 03 marzo 2011 : 20:47:15

allora...

In laboratorio abbiamo cercato di determinare la concentrazione del citocromo c ossidato e ridotto sapendo che in una cuvetta spettrofotometrica abbiamo aggiunto prima 20 microlitri di citocromo c ossidato. Abbiamo letto la sua assorbanza a 550 nm pari a 0,12. Il coefficente di estinzione millimolare per il citocromo c ossidato a 550 nm credo che sia 19 (non saprei)

Poi aggiungendo pochi grani di ditionitio di sodio che serve a ridurre il citocromo c dalla forma ox alla forma ridotta. Siamo andati nuovamente a leggere l'assorbanza a 550 nm pari a 0,53. Il coefficente di estizione millimolare per il citocromo c ridotto credo sia 27 (ho i miei dubbia anche su questo valore).

Quindi la concentrazione si ricava dividendo il rispettivo valore di assorbanza per il coefficente di estinzione millimolare.

A questo punto il mio prof. ha spiegato che si può ricavare la concentrazione del citocromo c ridotto usando il punto isosbestico a 540 nm ma non ho capito come. Al punto isosbetico dovrebbe esserci un unico valore di epsilon sia per la forma ossidata che ridotta.(pari a 21 forse). Credo che si sottragga all'assorbanza a 550 del citocromo c ridotto l'assorbanza a 540 nm, e si divida tutto per epsilon. Sapete dell'esistenza di questo metodo? non so se funzioni così.... chiedo umilmente aiuto.

Inoltre go trovato un file sui internet dove spiega invece che per ricavare la concentrazione di citrocromo c ridotto si sottrae all'assorbanza a 550 nm del citocromo c ridotto quella a 550 nm del citocromo c ossidato e si divide tutto per 19.

Non saprei....

NAB
Nuovo Arrivato

19 Messaggi

Inserito il - 05 marzo 2011 : 19:36:46

ragazzi....se qualcuno mi aiuta mi fa un grande favore....

chim2
Utente Attivo

2110 Messaggi

Inserito il - 05 marzo 2011 : 19:56:43

http://goldbook.iupac.org/I03310.html
http://books.google.it/books?id=XVPt6yF9yDMC&pg=PA223&lpg=PA223&dq=punto+isosbestico&source=bl&ots=Kzk5I6N4tS&sig=Z0mjruUFdATgQPL9Nj41eSqPSlU&hl=it&ei=EIZyTY-mKNCwhQfgouA6&sa=X&oi=book_result&ct=result&resnum=2&ved=0CBsQ6AEwATgK#v=onepage&q=punto%20isosbestico&f=false

NAB
Nuovo Arrivato

19 Messaggi

Inserito il - 05 marzo 2011 : 20:06:43

ma i coefficienti di estinzione del citocromo c a 550 nm quali sono ?

chim2
Utente Attivo

2110 Messaggi

Inserito il - 05 marzo 2011 : 20:22:39

non saprei...prova a continuare a cercare in rete

NAB
Nuovo Arrivato

19 Messaggi

Inserito il - 05 marzo 2011 : 20:25:55

eh.... non ci sono in rete... per questo chiedevo a voi se magari su qualche protocollo avevate i valori....

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