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Miciaglo
Nuovo Arrivato

Prov.: TV

40 Messaggi

Inserito il - 25 marzo 2011 : 13:07:25

Premetto che ero indecisa se mettere questo topic in biologia molecolare o qui.. spero di non aver sbagliato visto che la materia di studio nel mio caso � ingegneria genetica :)

Studiando gli adattatori di conversione dalle diapositive del professore (che ha detto non serviva comprare un libro ma bastava studiare da l�, io idiota che lo ha ascoltato per risparmiare 90 euro -.-) mi sono venuti alcuni dubbi osservando questa figura:

E'spiegato che gli adattatori sono sequenze di oligo sintetiche che hanno lunghezze diverse (quelli di conversione hanno un dominio a doppia elica e due a singola, e quelli normali hanno un solo dominio a singola elica).
Essendo sintetici non possiedono l'estremit� 5' con il fosfato.
Per utilizzare l'adattatore viene fosforilato in 5' uno dei due oligo (nel caso dell'immagine quello di destra che poi appare "sotto" come seconda elica), e ci� evita che l'adattatore si richiuda con se stesso.
Fin qui ok, presumo di aver capito e che sia giusto.
Il mio problema sorge nell'unione con DNA estraneo e vettore: se il mio adattatore ha solo un 5'p e l'altro � un 5'OH come si fa a legare al resto del DNA? Dovrebbe esserci un legame tra P e OH e non tra OH e OH.

Cosa mi sono persa? dove ho sbagliato?

Riporto le parole scritte sulla slide che contiene l'immagine che ho messo:

Citazione:
1.Si fosforila solo uno dei due oligo (EcoRI), per impedire la reazione di autopolimerizzazione.
2.Si associano i due oligo a lunghezza diversa.
3.Si mescolano il DNA bersaglio con estremit� EcoRI, il vettore con estremit� BamHIe gli adattatori in un�unica reazione di ligazione.
Un sottoprodotto della ligazionesono dimeri di adattatori legati tra loro attraverso le estremit� EcoRI. Tuttavia queste molecole non rappresentano un serio problema perch� non sono in grado di legare il vettore con l�inserto.

ps: A breve sar� senza internet e fino all'esame non potr� pi� controllare le risposte.. Vi chiedo di rispondere prima possibile.. Grazie :)

Miciaglo
Nuovo Arrivato

Prov.: TV

40 Messaggi

Inserito il - 27 marzo 2011 : 15:04:06

proposta: pu� essere che se fatti in un sistema in vivo poi venga riparato dagli enzimi della cellula?

per� non mi quadra lo stesso

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 27 marzo 2011 : 16:58:20

Beh s� � come hai detto tu! Questo � un clonaggio, il tuo vettore con l'inserto alla fine conterr� un nick, appunto perch� c'� l'OH al posto del P, ma poi una volta messo nelle cellule il sistema di riparazione chiuder� il nick.