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Introne
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
 Inserito il - 05 aprile 2011 : 00:49:30
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Ciao a tutti ragazzi,devo fare degli esercizi di biochimica ma sinceramente non so come risolverli,qualcuno può darmi una mano??
Ve li posto qui:
1) Il dosaggio di un estratto cellulare per l’enzima fosfatasi alcalina ha dato come risultato #916;A/min = 0,056. Considerato che il #916;#949;=18,5 mM-1 cm-1 a 410 nm nelle condizioni di saggio e che ho utilizzato 30 µl di estratto in un volume finale di 1 ml, calcolare le Unità enzimatiche per millilitro contenute nell’estratto.
2) Una retta di taratura per la determinazione colorimetrica della concentrazione di proteine con il metodo di Bradford ha dato i seguenti risultati:
BSA mg/ml Assorbanza a 595 nm
0,001 0,022
0,002 0,050
0,003 0,075
0,004 0,100
0,005 0,125
0,006 0,150
0,007 0,172
Riportare i dati su un grafico utilizzando carta millimetrata
Un campione a concentrazione proteica ignota (X) è stato diluito 50 volte per essere saggiato con lo stesso metodo e le assorbanze ottenute per una prova in doppio sono state le seguenti: 0,136 e 0,140.
Calcolare la concentrazione di proteine nel campione (X).
3)Ho preparato un estratto cellulare che ritengo contenere circa 4 mg/ml di proteine e di cui devo determinare precisamente il contenuto proteico. Considerando che userò il metodo di Bradford, quante volte devo diluire il mio campione per poter utilizzare la retta di taratura descritta nell’esercizio 2? .
4) Devo preparare 50 ml di una soluzione 5 mM di adenosina; considerato che essa ha un peso molecolare di 267,24 u.m.a., quanta polvere devo pesare? Considerato che l’adenosina a 265 nm, a 25 °C e pH 7 ha #949;= 13,69 mM-1 cm-1, quante volte dovrò diluire la soluzione per ottenere una assorbanza di 0,8 a 265 nm nelle stesse condizioni di pH e temperatura, utilizzando cuvette con cammino ottico di 1 cm?
5)Il virus 1 dell’immunodeficienza umana (HIV-1) codifica per una proteasi (Mr 21.500 u.m.a.) essenziale per l’assemblaggio e la maturazione del virus. La proteasi catalizza l’idrolisi di un substrato eptapeptidico con una kcat di 1000 s-1 e una KM di 0,075 M.
a)Calcolare la Vmax per l’drolisi quando la la proteasi dell’HIV-1 è presente a 0,2 mgxmL-1;
b) Quando il legame peptidico(-CO-NH-) suscettibile all’idrolisi da parte dell’enzima viene sostituito da -CH2-NH-, il derivato risultante non può essere più scisso dalla proteasi e agisce come un inibitore.
Nelle stesse condizioni sperimentali del punto a) ma in presenza di 2,5 micro M di inibitore, la Vmax risulta essere di 9,3x10-3 Ms-1 e la KM di 0,12 M.
c)Che tipo di inibizione avviene?
d)Questo tipo di inibizione è atteso per tale struttura?
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 05 aprile 2011 : 01:21:19
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| Tu cosa hai provato a fare? Scrivi il tuo procedimento, anche se incompleto e/o sbagliato, così ci ragioniamo insieme. |
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Introne
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 07 aprile 2011 : 20:21:14
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Citazione:
Messaggio inserito da chick80
Tu cosa hai provato a fare? Scrivi il tuo procedimento, anche se incompleto e/o sbagliato, così ci ragioniamo insieme.
Fino a ora i primi quattro esercizi alla fine sono riuscito a risolverli,il quinto non so proprio come fare! |
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Introne
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 10 aprile 2011 : 12:41:14
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nessuno sa darmi una mano?? |
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Pipps
Utente Junior
244 Messaggi |
Inserito il - 16 aprile 2011 : 19:43:52
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Ciao,
io avrei svolto così:
a) Sapendo che Vmax=Kcat x conc.E puoi calcolarti la Vmax. Dato che la Vmax in genere è espressa in Ms-1 allora ti conviene convertire la conc. enzimatica:
0,2mg/ml=0,2-10-3 g/ml (sta per 0,2 per 10 alla meno 3)
Ti calcoli quindi le moli (g/peso molecolare):
0,2x10-3 / 21500 = 9x10-9 che in L diventa 9x10-9/1x10-3=9x10-6M
Ora calcoli la Vmax=1000s-1 x 9x10-6 = 9x10-3Ms-1
b) Dato che in presenza dell'inibitore la KM aumenta e la Vmax resta uguale (siamo nell'ordine di 10-3) questo è un caso di inibizione competitiva, tipico di inibitori delle proteasi HIV-1.
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