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Tommasina
Nuovo Arrivato

29 Messaggi

Inserito il - 15 maggio 2011 : 16:50:36

Salve a tutti, la mia domanda �: se creo una particolare proteina di fusione del mio gene con un qualunque tag e trasfetto le cellule con il plasmide di espressione che mi permette di farla esprimere, come posso essere sicura che la conformazione originale della mia proteina non cambia a causa della proteina tag e che questo non possa infleunzare eventualmente il suo comportamento e/o localizzazione all'interno della cellula?

SpemannOrganizer
Utente

Citt�: Los Angeles

955 Messaggi

Inserito il - 15 maggio 2011 : 17:11:40

Di questo non puoi mai esserne sicura al 100%. Ecco perch� generalmente si fanno due costrutti: uno con il tag all'N-terminale della tua proteina e uno con il tag al C-terminale. Questo si fa generalmente quando non si trovano particolari info in letteratura: per esempio se la tua proteina � stata gi� oggetto di "tagging2 puoi vedere dove hanno messo il tag e se la proteina manteneva la sua funzionalit�.
Inoltre,farei molta attenzione a mettere il tag in un dominio particolarmente importante 1)per la regolazione della proteina o 2)per la sua attivit� biologica/enzimatica o 3) per la sua localizzazione o 4)interazione con altre proteine. In tal caso, metti il tag in posizione opposta. So anche che a volte � necesssario mettere il tag "interno" alla proteina stessa, ma � un caso pi� raro.