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Vanilla Sky
Utente Junior
204 Messaggi |
 Inserito il - 02 giugno 2011 : 18:38:58
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Ciao Vertigo,
figurati non insulti l'intelligenza di nessuno, anzi fai bene a chiedere!;)
Ti segnalo un vecchio post che magari ti può essere utile: http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=10756
Come sicuramente sai, esistono vari modi per "unire" le molecole di DNA, a seconda di come sono le estremità e la DNA polimerasi I rappresenta uno dei metodi: infatti è in grado sia di tagliare che di unire molecole di DNA. Dall'immagine presente nel post che ti ho segnalato, puoi vedere che la sequenza del sito di taglio della topoisomerasi è CCCTT. L'enzima riconosce il sito e taglia il plasmide, creando così delle estremità coesive di timina al 3' alle quali la topoisomerasi è attaccata. Successivamente quando aggiungerai il tuo inserto, che ha le estremità coesive di adenina al 3'(la coda di adenine è aggiunta dalla Taq), la topoisomerasi non farà altro che saldare le due estremità T-A complementari tra loro. Proprio per questo questa metodica viene chiamata anche clonaggio TA. Questo tipo di reazione è più veloce di quella catalizzata dalla DNA ligasi.
Spero di esserti stata d'aiuto.
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Topoisomerasi I nei vettori di clonaggio
Didattica
Inserito il - 01 giugno 2011 : 20:44:21
Inserito il - 03 giugno 2011 : 12:08:23
