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LadyV
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4 Messaggi
Inserito il - 30 giugno 2011 : 12:40:07  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di LadyV Invia a LadyV un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti! Tra qualche giorno ho l'esame di ingegneria genetica e consultando le domande di esame sono incappata in queste:

- la sezione che deleti e quella che inserisci o sostituisci (tramite mutagenesi con PCR), ha una lunghezza particolare?????

1-qual è la lunghezza limite per fare un'inserzione in un amplicone col metodo della PCR in tre passaggi e perchè?

- In una sostituzione: quanto deve essere lungo l'amplicone da sostituire e quanto è lunga la sequenza da inserire.

Sono tutte + o - uguali, ma non ho idea di quanto debba essere lungo sto frammento!! Qualcuno può aiutarmi??? Grazie in anticipo!
PS lo so che l'italiano delle domande lascia a desiderare, ma erano scritte così!

LadyV
Nuovo Arrivato



4 Messaggi
Inserito il - 30 giugno 2011 : 13:04:09  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di LadyV Invia a LadyV un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ho un altro problema: quali sono i controlli che devo effettuare x verificare che la mutagenesi è avvenuta correttamente? Cioè,
come faccio a sapere se l'integrazione/delezione è avvenuta? Ho pensato che il modo + rapido fosse quello di correre l'amplicone wt e quello mutato su gel di elettroforesi per poi confrontarne il PM! ma per sapere se la mutazione è avvenuta nel punto giusto come faccio? Tramite southern? e come di preciso? oppure l'unico modo è sequenziare e stop??
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LadyV
Nuovo Arrivato



4 Messaggi
Inserito il - 01 luglio 2011 : 12:23:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di LadyV Invia a LadyV un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Non può aiutarmi proprio nessuno? nessuna sa quanto può essere lungo il frammento da sostituire/inserire/deletere?
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immetella
Nuovo Arrivato

Dory

Prov.: Pescara
Città: Pescara


32 Messaggi
Inserito il - 05 luglio 2011 : 14:37:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di immetella Invia a immetella un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Per il frammento da inserire/tagliare non so dirti, per la mutagenesi invece l'unica tecnica che ti dice con certezza che la mutazione c'è è il sequenziamento!
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