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Discussione

Ilariaad
Nuovo Arrivato

Prov.: Verona
Citt�: Verona

3 Messaggi

Inserito il - 08 luglio 2011 : 18:54:50

Ciao, qualcuno mi potrebbe spiegare cos'� la GAPDH usata come controllo interno in PCR?

Grazie

Luss1908
Nuovo Arrivato

49 Messaggi

Inserito il - 10 luglio 2011 : 11:00:48

La gliceraldeide-3-fosfato deidrogenasi � un enzima il cui gene � espresso costitutivamente in tutti i campioni. Per la quantificazione relativa della real time si usa il metodo del deltadeltaCt che calcola le variazioni dell'espressione genica come differenza relativa tra un campione sperimentale e uno di riferimento detto calibratore. E' necessario sia per il campione che per il calibratore normalizzare il valore del Ct del gene in esame con quello di un gene usato come controllo endogeno(e spesso viene usata la GAPDH). Ci� viene fatto per normalizzare i dati rispetto alla quantit� di DNA caricato e alle variazioni di efficienza della reazione. La normalizzazione con il controllo endogeno si effettua nel modo seguente: Ct campione - Ct controllo endogeno=delta Ct e Ct calibratore - Ct controllo endogeno=delta Ct. Dopo aver calcolato i delta Ct si calcola il deltadelta Ct, cio� delta Ct campione- delta Ct calibratore. Era questo quello che volevi sapere?