Purificazione proteine con fenolo cloroformio

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Autore

Discussione

Lucia
Nuovo Arrivato

Prov.: Caserta
Città: Caserta

19 Messaggi

Inserito il - 11 novembre 2006 : 14:44:17

Ciao a tutti,sono Lucia, oggi è il mio primo giorno tra voi.
Volevo chiedervi se qualcuno di voi può spiegarmi come fare ad isolare le proteine da un estratto cellulare con l'uso del fenolo cloroformio. Credo di aver capito che le proteine solubili rimangono nella fase fenolica (organica) e quelle insolubili nell'interfaccia tra le due fasi.

Come devo procedere?
Grazie a tutti per l'aiuto.

chick80
Moderatore

Città: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 11 novembre 2006 : 21:55:18

Ciao e benvenuta!

Sì, le proteine rimangono nel fenolo o comunque all'interfaccia fra le due fasi.

Il metodo del fenolo/cloroformio in realtà è più comunemente usato per estrarre gli acidi nucleici, per le proteine vedi ad es.:
http://www.molecularlab.it/protocolli/protocol.asp?id=11

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GFPina
Moderatore

Città: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 14 novembre 2006 : 16:42:57

Si infatti, il fenolo/cloroformio si usa in genere per estrarre gli acidi nucleici!

Però una volta estratti gli acidi nucleici puoi anche isolare le proteine dalla fase organica e interfase.
Non ho trovato un protocollo però... ma se ti interessa puoi leggere quello del trizol o del TRI-Reagent, ad es. questo:
http://www.bio-optica.it/pdf/TRI118.pdf

ma se devi estrarre solo proteine ti consiglio un metodo altrenativo... come quello di chick!!