quantità siRNA per trasfezione con lipofectamine2000

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wunzettina
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 19 settembre 2011 : 22:30:55

Ciao a tutti!!

qualcuno di voi ha già utilizzato siRNA per silenziare un gene di interesse con lipofectamine2000?
Ho provato ad utilizzare diverse condizioni, seguendo il foglietto illustrativo della lipo. Per cells in multiwell da 6 consigliano 100pmoli di siRNA e 5 ul di lipo. Così non funzionano proprio. I sirna funzionano perchè li ho provati per nucleofezione (Amaxa nucleofector). Purtroppo le cells che devo trasfettare non possono essere staccate, quindi non posso utilizzare la nucleofezione.

Qualcuno di voi sa darmi delle indicazionisulle quantità di sirna??? magari qualcuno ha avuto lo stesso problema. Le cellule in questione sono mouse embryonic stem cells se può essere utile.

grazie a tutti per le risposte che spero arriveranno...:-)

buona serata

wunz

molecola84
Nuovo Arrivato

Prov.: ol
Città: ugan

88 Messaggi

Inserito il - 21 gennaio 2013 : 15:58:07

ciao io in piastre da 100mm arrivo anche a 350pmol e 30-40 microlitri di lipo...
dopo 6h ti convine poi cambiare il terreno di coltura perchè le lipo 2000 sono tossiche