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 Calcolo concentrazione DNA ed RNA
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Aspasia88
Nuovo Arrivato



10 Messaggi

Inserito il - 31 ottobre 2011 : 22:16:38  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Aspasia88 Invia a Aspasia88 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Qualcuno potrebbe aiutarmi a capire come si calcola la concentrazione di DNA ?
Mi trovo in difficoltà non mi è molto chiaro il concetto :(

-Qual è la concentrazione DNA a doppio filamento se la soluzione diluita 30 volte ha un#146; A260nm = 0,6 OD

-Qual è il valore di Assorbanza a 260 nm di una soluzione che contiene 1mg/ml di RNA?

Grazie a chiunque vorrà dedicarmi qualche minuto del suo tempo!

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 01 novembre 2011 : 07:51:08  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
http://www.molecularlab.it/principi/calcoli-laboratorio/letture-spettrofotometro.asp

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Rsr
Nuovo Arrivato


Città: Modena


15 Messaggi

Inserito il - 01 novembre 2011 : 20:56:57  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Rsr Invia a Rsr un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ti dico quello che io faccio in lab per il calcolo della [DNA:

dopo l'estrazione del DNA, vai a leggere con lo spettrofotometro l'assorbanza a 260, quella del dna, e l'assorbanza a 280. Questo si fa perché con il processo di estrazione "puoi portarti dietro", nonostante l'uso di proteasi, delle proteine oppure ancora la soluzione è contaminata da fenolo(in questo caso l'essorbanza di riferimento è 230). In base al valore del rapporto A260/A280(o 230) riesci a dare una stima di quanto il campione sia contaminato da proteine/fenolo.

per il calcolo della concentrazione la formula è:

A226*fattore 50*fattore di diluizione

il fattore di diluizione viene calcolato prendendo come riferimento una cuvetta che contenga solo h20 distillata+ il solvente(soluzione detta bianco) al fine di tarare lo spettrofotometro
. Se diluisci di 30 volte allora il tuo fattore di diluizione è 1000/30

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