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Autore

Discussione

terreno85
Utente Junior

235 Messaggi

Inserito il - 01 novembre 2011 : 19:42:18

ciao ragazzi sapete per caso come si calcola la % di attività enzimatica per via spettrofotometrica, grazie mille in anticipo

Una teoria può esserre provata da un esperimento. Ma nessun percorso guida dall'esperimento alla nascita di una teoria

v i t
Nuovo Arrivato

27 Messaggi

Inserito il - 04 novembre 2011 : 23:41:05

penso si calcoli dalla differenza di assorbanza.. ad esempio se consideri una reduttasi, che ti riduce un composto x ad y: puoi costruirti una retta di taratura per il composto y utilizzando dei campioni a concentrazione nota di tale composto: poi per determinare l'attività enzimatica prepari dei campioni in cui aggiungi però il composto x e dopo aver incubato vai a leggere allo spettrofotometro il valore di assorbanza ottenuto dal quale potrai ricavarti la concentrazione di composto y ridotto per mezzo della legge di Beer A = ebc dove A è l'assorbanza e c è la concetrazione.Ricapitolando:
- costruisci una retta di taratura Y = coeff. di estinzione molare X ( dove Y = assorbanza e X = concentrazione) attraverso il software del computer collegato allo strumento, così che a concentrazioni note di campione y conoscerai le rispettive assorbanze ( lo spettrofotometro sarà impostato alla lunghezza d'onda, ricavata in modalità scan precedentemente, alla quale il composto y ridotto assorbe di più)
- allestisci dei campioni in cui aggiungi le micromoli in quantità nota del composto x che dovrà essere ridotto e la quantità nota di enzima. Dopo l'incubazione misuri nuovamente l'assorbanza di questi campioni, e vai a sostituirla nell'equazione prima calcolata al valore di A, così da poterti calcolare le concentrazioni di composto Y ridotto formatosi nei diversi campioni preparati. A questo punto fai la differenza tra micromoli iniziali del composto X e micromoli finali di y.
- puoi calcolarti l'attività enzimatica come micromoli di composto y ridotto / tempo di reazione.

spero sia abbastanza chiaro :)