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scholar
Nuovo Arrivato
6 Messaggi |
 Inserito il - 08 novembre 2011 : 12:06:00
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salve a tutti!
qualcuno può spiegarmi perchè un DNA batterico (sia Gram+ che Gram-) estratto con fenolo-cloroformio risulta amplificabile (sequenza universale 16S) se sottoposto subito a PCR, mentre dopo uno stoccaggio degli estratti a -20 °C per 3 mesi alcuni estratti si amplificano e altri no?
grazie mille!
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roberta.s
Utente Junior
Città: Parigi
564 Messaggi |
Inserito il - 08 novembre 2011 : 13:58:47
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| Non ho capito: estrai il DNA, lo congeli a -20°C e dopo 3 mesi la PCR non funziona? |
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scholar
Nuovo Arrivato
6 Messaggi |
Inserito il - 08 novembre 2011 : 14:03:04
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non proprio così...
la pcr fatta SUBITO funziona, mentra sull'estratto conservato per tre mesi a -20 °C non funziona |
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roberta.s
Utente Junior
Città: Parigi
564 Messaggi |
Inserito il - 08 novembre 2011 : 14:28:37
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| hai provato a controllare la qualità del DNA prima di fare la PCR? Mi sembra pero' strano...il DNA a -20°C dovrebbe conservarsi bene, anche se non ho esperienza con DNA batterico. |
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scholar
Nuovo Arrivato
6 Messaggi |
Inserito il - 08 novembre 2011 : 14:31:47
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sto facendo una valutazione dell'efficacia di vari kit commerciali confrontati con metodo fenolo:cloroformio.
le purezze sono tutto ok, tant'è che la PCR fatta subito viene.
probabilmente succede qualcosa durante lo stoccaggio, ma non riesco a capire cosa.
forse qualche residuo dell'estrazione che è a livelli sub-inibitori ma poi, durante lo stoccaggio, rovina il DNA? |
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Limpet
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
Città: Roma
83 Messaggi |
Inserito il - 09 novembre 2011 : 16:13:06
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Scusami, ma in che buffer conservi il campione?
inoltre, l'hai quantizzato su gel per vedere che è successo? |
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Discussione |
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estrazione con fenolo
Didattica
