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Limpet
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 Inserito il - 09 novembre 2011 : 15:37:25
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Ho letto che avete già fatto una discuzzione simile, ma vorrei sopporvi il mio caso.
Parto da campioni conservati a - 20°C; in passato ho già estratto con successo DNA con trizol, le modifiche da apportare sono riportate sul datasheet dell'invitrogen (la casa produttrice) la quale dice, ovviamente, alla fase di separazione, di eliminare la fase acquosa, che contiene RNA, e di processare il resto: interfaccia (proteine e dna) e fase organica (DNA). Fatto questo, questa volta,però, non mi viene niente!! l'unica modifica è che non lavoro con centrifuga a 4°C. Ma trattandosi di DNA non dovrebbe importarmi visto che quando uso il buffer classico di estrazione con i solventi organici (che però mi fa perdere una cofana di tempo) non la uso mai.Può influenzarmi la resa, al massimo lo vedrei degradato, ma invece, non estraggo niente!
idee..?
merci!
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Limpet
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 Inserito il - 10 novembre 2011 : 00:23:00
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non mi abbandonate!!! |
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Limpet
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Inserito il - 11 novembre 2011 : 12:29:06
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la storia continua...
Sono riuscita a estrarre, però solo RNA!!e non lavoro a 4°C, senza accortezze di puntali con filtro, guanti etc; ma alla quantizazzione su gel escono solo le bande di RNA, mistero...
dov'è il mio DNA?? |
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Limpet
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Inserito il - 16 novembre 2011 : 22:18:43
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....ok forse sono giunta a una soluzione, anche se solo ipotetica e soprattutto perchè mi sono rotta...Questo trizol l'ho avuto da una collega (che non posso contattare) in una falcon, con scritto solo TRIZOL, per conservare dei campioni a -80°C; il dubbio/chiarimento ultimo è: esiste un tipo di trizol che mi impedisce di isolare il DNA??? so che ne esistono più tipi...quindi? ne sapete qualcosa?
sempre io, sempre grazie |
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Moloney
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Inserito il - 19 novembre 2011 : 00:12:07
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| Mi pare altamente improbabile... Comunque per risolvere la questione dovresti dire di preciso da che cellule o tessuto parti, se quello che è congelato a -20° è il campione in trizol o altro; quale metodo utilizzi dopo aver scongelato il campione per estrarre il DNA, ecc ecc... |
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Limpet
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Inserito il - 20 novembre 2011 : 11:15:34
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| prendo il protocollo e ti rispondo per bene, |
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trizol estrazione dna
Didattica
