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CRISTIAN
Nuovo Arrivato

92 Messaggi

Inserito il - 01 dicembre 2011 : 10:33:17

Ciao a tutti, vorrei verificare se una proteina ricombinante possiede attività dnasica, qualcuno sa come potrei fare? Esiste qualche protocollo a rigurado?
Grazie mille

roberta.s
Utente Junior

Città: Parigi

564 Messaggi

Inserito il - 01 dicembre 2011 : 12:23:06

Mah... dovreisti dirci di più riguardo la natura della proteina: ha una sequenza di legame a livello del DNA o taglia a caso? E' parte di un complesso? é espressa in quale organismo?

CRISTIAN
Nuovo Arrivato

92 Messaggi

Inserito il - 01 dicembre 2011 : 14:13:25

Si tratta di una proteina ricombinante espressa normalmente in alcune forme tumorali.
Quello che vorrei fare è vedere in vitro se il trattamento di questa proteina con del DNA lo taglia, e usare come controllo della Dnasi.
Qualcuno ha un protocollo?

roberta.s
Utente Junior

Città: Parigi

564 Messaggi

Inserito il - 01 dicembre 2011 : 14:28:01

Ma sai dove taglia? Se si' puoi fare un southern blot

CRISTIAN
Nuovo Arrivato

92 Messaggi

Inserito il - 01 dicembre 2011 : 14:55:47

non so nulla, devo solo verificare se taglia

chinasi84
Nuovo Arrivato

11 Messaggi

Inserito il - 01 dicembre 2011 : 14:57:45

Ciao,
non so se può fare al caso tuo..ma per saggiare la capacità di una sostanza di produrre danno al DNA (rottura a singolo o doppio filamento)si può utilizzare anche il Comet assay, un'elettroforesi su gel di agarosio su singola cellula.
Se vuoi però vedere qualcosa di altamente specifico e testare direttamente su DNA allora anch'io penserei ad un southern anche se non sono un'esperta.

CRISTIAN
Nuovo Arrivato

92 Messaggi

Inserito il - 01 dicembre 2011 : 15:04:26

Scusate, ma prendendo del DNA umano e aggiungendo la mia proteina e come controllo lo stesso DNA trattato con DNasi, successivamente si carica in gel di agarosio e si valuta la degradazione?

chinasi84
Nuovo Arrivato

11 Messaggi

Inserito il - 01 dicembre 2011 : 15:10:37

secondo me si..ti carichi anche il DNA di controllo ovvero quello non digerito ne dalla DNAsi ne dalla tua proteina e fai un paragone..potrebbe essere un test iniziale

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