PCR e diluizione

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Stella88
Nuovo Arrivato

3 Messaggi

Inserito il - 18 dicembre 2011 : 18:43:24

Buonasera ragazzi, domani mi laureo, e sono stata colta da un dubbio; quando preparo la mix di Pcr, seguo il seguente schema:
Buffer 10x 2 µl
BSA 100x 0.5 µl
dNTP mix 10x 2µl
Primer forward (20ng/#61549;l) 0.8µl
Primer reverse (20ng/#61549;l) 0.8µl
Taq DNA polimerasi (3u/µl) 0.5µl
ddH2O 12,4µl
DNA 1µl
Volume totale 20µl

Ma il fatto che ad esempio il buffer sia 10X vuol dire che è stato prima diluito all'1X e poi usato nella mix, o che è stato usato direttamente a 10X? stessa cosa per ma dNTP mix e per la BSA.. sono stati prima diluiti alla concentrazione 1X o sono stati usati direttamente?

Giuliano652
Moderatore

Prov.: Brescia

6941 Messaggi

Inserito il - 18 dicembre 2011 : 18:49:24

buffer 10x 2 ul
volume totale 20 ul

direi che è stato diluito fino ad 1x. Solo sulla BSA non mi ritrovo (20/0.5=40, non 100)

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Stella88
Nuovo Arrivato

3 Messaggi

Inserito il - 19 dicembre 2011 : 04:25:08

Cioè?è stato prima diluito e poi utilizzato o utilizzato direttamente x preparare la mix?

Giuliano652
Moderatore

Prov.: Brescia

6941 Messaggi

Inserito il - 19 dicembre 2011 : 05:36:44

cioè, visto ceh il folume finale è 10 volte quello iniziale è stato usato direttamente ed ha raggiunto la concentrazione desiderata (1x) nella soluzione finale