| Autore |
Discussione |
|
|
Limpet
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
Città: Roma
83 Messaggi |
 Inserito il - 10 marzo 2012 : 15:28:40
|
Devo preparare un buffer in cui è scritto solo, fra gli elementi, Tris-HCl, ma senza specificare a che pH. Si vende anche così e non lo so? Perchè in lab ho il Tris...quindi?
TE buffer (500 mM Tris–HCl, 200 mM EDTA, 10 mM NaCl, pH 9.0)
|
|
|
|
|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
|
|
GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 10 marzo 2012 : 16:21:46
|
Si che c'è scritto il pH è in fondo! pH 9
Devi fare una soluzione che contenga tutte quelle cose e che abbia un pH finale di 9.
Quindi utilizzerai del Tris-HCl se hai quello oppure del tris base facendo attenzione che il PM è differente! Quindi fai i conti con il reagente giusto.
L'HCl viene utilizzato per portare il tris ad un determinato pH, il tris è molto basico quindi devi aggiungere tanto più HCl tanto più acida dovrà essere la tua soluzione.
Comunque per avere un'idea di quanto HCl dovrai aggiungere puoi utilizzare questo calcolatore: http://www.cytographica.com/lab/HHTris.html
N.B. Nota generale: pesa tutte le poveri e scioglile nell'80% dell'acqua necessaria (mai tutta!) poi porta al pH desiderato e infine porta a volume.
Visto che devi preparare il TE per quanto riguarda l'EDTA hai una soluzione già pronta o vedi partire dalla polvere? |
 |
|
|
Limpet
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
Città: Roma
83 Messaggi |
Inserito il - 10 marzo 2012 : 16:45:47
|
Ok, certo il pH del buffer decide. Va bene però lo stesso se uso il Tris (in polvere) e non il Tris HCl per la molarità?
ovvero se poi equilibro il pH con HCl? non ce l'ho il Tris-HCl in lab.....
Parto dalle polveri.
|
|
|
|
GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 10 marzo 2012 : 17:58:54
|
A parte il fatto che quello che hai scritto non è il TE che ha una formulazione diversa, googolando ho scoperto che quello che hai scritto tu si chiama TE9.
Comunque sì, la quantità di polvere da pesare la calcoli in base al peso molecolare del tris e sarà comunque 500mM.
Ti chiedevo dell'EDTA perchè non è facile da sciogliere in genere, se prepari uno stock di EDTA 0,5M non si scioglie finchè il pH è a 8 e devi aggiungere molta NaOH.
In genere il TE (10mM Tris, 1mM EDTA) si prepara a partire da delle soluzioni madre di Tris-HCl e di EDTA.
Non ho mai preparato questo tampone TE9, ma personalmente preparerei le soluzioni madri di Tris-HCl e EDTA a pH 9 piuttosto che pesare le polveri assieme, però vedi tu. |
|
|
|
Limpet
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
Città: Roma
83 Messaggi |
Inserito il - 11 marzo 2012 : 10:58:36
|
si mi sembra una buona idea, hai ragione. Sei sempre utilissima! grazie |
|
|
|
GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 11 marzo 2012 : 11:15:16
|
Cercando ancora un po' in google, ho trovato una sola ricetta del TE a partire dalle polveri e non dalle soluzioni madri ed è questa: http://eebweb.arizona.edu/blast/Recipes.html#TE_10_mM_Tris__1mM_EDTA
Ti dice di sciogliere prima il tris e poi una volta sciolto aggiungere l'EDTA, in effetti ha senso come cosa perchè il tris è molto basico e quindi avresti una soluzione basica in cui sciogliere l'EDTA.
Puoi provare anche così.
|
|
|
|
Limpet
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
Città: Roma
83 Messaggi |
Inserito il - 11 marzo 2012 : 22:39:44
|
| sempre perfetta! graziegrazie, |
|
|
|
prossima biologa
Utente Attivo
1437 Messaggi |
Inserito il - 09 ottobre 2015 : 14:39:32
|
ciao GFPina, e ciao a tutti. è tanto che non scrivo.
tiro su questo topic perchè ho un problema.
partendo dalle polveri, devo preparare il TRIS-HCl EDTA
solo che quando ho aggiunto la polvere di EDTA alla soluzione di tris HCl pH 8.00 la soluzione non si è sciolta per molto tempo e alla fine ho commesso un errore e devo rifarla... come posso fare se non si scioglie di nuovo, è normale ho letto, ma come faccio? |
Aiuto in biochimica?guarda qui
Info sul lavoro di biologo?guarda qui |
|
|
|
GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 09 ottobre 2015 : 19:03:36
|
Ciao prossima biologa, è un po' che non ci si sente! 
Il protocollo che hai usato com'era?
Non puoi fare tutto partendo da delle soluzioni madri?
L'EDTA come dicevo, si inizia a scogliere solo quando il pH è attorno a 8, quindi con Tris-HCl pH 8.00 sei proprio al limite, basta che il pH sia un pochino più acido e l'EDTA non si scioglie!
Un conto è se metti l'EDTA in una soluzione di Tris (tris Base) che è basica e quindi non ti dovrebbe creare problemi, ma in una soluzione di Tris-HCl pH 8, è più difficile. Dovresti basificare la soluzione e avere taaanta pazienza! |
|
|
|
prossima biologa
Utente Attivo
1437 Messaggi |
Inserito il - 11 ottobre 2015 : 00:29:18
|
Tris HCl 0.1M a pH 8.00
aggiungo EDTA 5mM
se aggiungo NaOH dici che lunedi riesco?
gia con il pHmetro che mi ritrovo è stato difficile portare il ph a 8, io lo misuro su piastra agitatrice, con magnetino ma nel momento che spengo il vortice, il ph cambia.forse è successo questo?
la soluzione di TRIS base inizialmente mi da un pH intorno a 10, devo aggiungere molto HCl 1N per abbassare il pH fino a 8.
se aggiungessi prima EDTA e poi HCl per portare pH a 8?
POTREI FARLO SECONDO TE? |
Aiuto in biochimica?guarda qui
Info sul lavoro di biologo?guarda qui |
|
|
|
GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 12 ottobre 2015 : 11:41:03
|
Ah ecco dov'è il problema!
Se parti dalle polveri, non devi portare a pH il Tris prima di mettere l'EDTA!
La soluzione di tris è basica e è meglio per sciogliere l'EDTA che è molto acido.
Devi fare così:
- sciogli il Tris base in un volume inferiore rispetto a quello che ti serve (80%)
- aggiungi l'EDTA e aspetti che si sciolga
- porti a pH 8
altrimenti, oltre al fatto che fai più fatica a sciogliere l'EDTA, aggiungendo prima HCl e poi NaOH per ribasificare fai una soluzione con anche NaCl!  |
|
|
|
picchiasebino
Nuovo Arrivato
Città: roma
52 Messaggi |
Inserito il - 13 ottobre 2015 : 09:26:52
|
| Se posso intervenire, io ho risolto la stessa situazione preparando uno stock di EDTA in soluzione liquida che conservo in lab ad una concentrazione bassa (0,5 M) e a pH 8. Il lavoro iniziale è un po' lungo (l'EDTA ci mette molto a stabilizzarsi a quel pH) ma nella pratica di laboratrio poi mi ritrovo una soluzione già pronta che aggiungo al TRIS senza i problemi di solubilità e a pH già intorno a 8. |
|
|
|
GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 14 ottobre 2015 : 15:03:04
|
Citazione:
Messaggio inserito da picchiasebino
Se posso intervenire, io ho risolto la stessa situazione preparando uno stock di EDTA in soluzione liquida che conservo in lab ad una concentrazione bassa (0,5 M) e a pH 8. Il lavoro iniziale è un po' lungo (l'EDTA ci mette molto a stabilizzarsi a quel pH) ma nella pratica di laboratrio poi mi ritrovo una soluzione già pronta che aggiungo al TRIS senza i problemi di solubilità e a pH già intorno a 8.
Quoto!
E' quello che dicevo fin dall'inizio, ci si mette un po' a preparare l'EDTA 0,5 M ma poi è pronto e si può utilizzare per diversi tamponi. |
|
|
| |
Discussione |
|
Tris-HCl
Didattica
