VOLUME and Co nell'estrazione Fenolo-cloroformio

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Limpet
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Prov.: Roma
Citt�: Roma

83 Messaggi

Inserito il - 21 marzo 2012 : 23:12:23

salve a tutti,
avrei bisogno di una conferma o, eventualmente, di un chiarimento.
In un protocollo di estrazione di DNA da formalina mi dice, superate varie fasi che non sto qui ad elencare, nella fase dei solventi organici, di aggiungere prima di fenolo, poi fenolo-cloroformio e poi cloroformio alcol-isoamilico. Ed � una cosa che si ripete in molti protocolli del genere. Quello che vorrei capire e se fra l'una e l'altra devo centrifugare e recuperare la fase acquosa o sono solo vortexare (come faccio di solito) e solo alla fine recuperare per poi precipitare l'acido nucleico. Da quello che ho letto in altri protocolli dovrebbe essere cos�. Ne capite il senso? che ne pensate?
Inoltre, per la quantit� di solvente da aggiungere, solitamente si parla in termini di volumi, ovvero un volume di buffer di estrazione (per es. 300ul) quindi uguale volume totale di solventi organici (100ul fenolo, 200ul cloroformio alcol isoamilico). Io manterrei questa regola generale, ma vorrei anche una vostra opinione. Grazie,