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cry87
Utente Junior
Città: milano
127 Messaggi |
 Inserito il - 23 aprile 2012 : 15:21:51
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Ciao a tutti, mi potreste dire come influisce la fosforilazione di certe proteine in un western blot? Perchè determina un ritardo elettroforetico?
grazie
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prossima biologa
Utente Attivo
1437 Messaggi |
Inserito il - 23 aprile 2012 : 15:44:28
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il concetto base riguarda il peso molecolare, hai un ritardo elettroforetico perchè la proteina fosforilata ha maggiore peso molecolare, quindi la migrazione è rallentata, ma sarebbe utile alla spiegazione sapere se ti riferisci a qualche proteina specifica.e in che condizioni effettuii l'elettroforesi per poi effettuare il western blot(trasferimento su filtro)
inoltre la proteina fosforilata ha cariche negative che la proteina non fosforilata non ha, ma se la memoria non mi inganna l'elettroforesi è una corsa da polo negativo a polo positivo quindi questo non dovrebbe influire, ma non faccio elettroforesi in lab da 2 anni quindi dovrei riprendere i libri e non mi va.
anzi.... aspetto tuoi dettagli maggiori e magari qualcuno che passa a smentire o confermare.
ciao!!! |
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 23 aprile 2012 : 16:27:50
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La memoria ti inganna: la corsa puo' esser anodica o catodica, dipende dal tipo di elettroforesi.
Il senso pero' è quello.
Oltretutto se si tratta di una elettroforesi nativa, ossia in cui le proteine mantengono la loro conformazione, la fosforilazione non cambia solo il peso molecolare o la carica della proteina, bensi' ne altera addirittura la struttura 3D e l'idrodinamicità, con alterazione della velocità di migrazione. |
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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cry87
Utente Junior
Città: milano
127 Messaggi |
Inserito il - 23 aprile 2012 : 16:38:39
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Grazie per le risposte. Cerco di essere più specifica. Sto leggendo un articolo di Zegerman dal titolo "Checkpoint-dependent inhibition of DNA replication initiation by Sld3 and Dbf4 phosphorilation" e devo descrivere le metodiche utilizzate.
Ho descritto l'elettroforesi, l'SDS-page, il western blot e fin ci siamo. Dovrei dire perchè la fosforilazione di Sld3 e Dbf4 causa un ritardo elettroforetico |
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 23 aprile 2012 : 17:06:21
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Posto che l'SDS-PAGE è un tipo di elettroforesi, penso che la risposta te l'abbia data prossima biologa.
Comunque, il ritardo elettroforetico di che entità è? Come fanno a stabilire che le proteine sono state fosforilate? Qual è l'entità della fosforilazione? |
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A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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prossima biologa
Utente Attivo
1437 Messaggi |
Inserito il - 23 aprile 2012 : 17:12:48
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Citazione:
Messaggio inserito da 0barra1
La memoria ti inganna: la corsa puo' esser anodica o catodica, dipende dal tipo di elettroforesi.
Il senso pero' è quello.
grazie.... mi sembrava che c'era dell'altro
Citazione:
Oltretutto se si tratta di una elettroforesi nativa, ossia in cui le proteine mantengono la loro conformazione, la fosforilazione non cambia solo il peso molecolare o la carica della proteina, bensi' ne altera addirittura la struttura 3D e l'idrodinamicità, con alterazione della velocità di migrazione.
infatti...
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cry87
Utente Junior
Città: milano
127 Messaggi |
Inserito il - 26 aprile 2012 : 13:12:49
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Ciao, mi date una mano a capire questa frase?
Phosphatase treatment of Sld3 purified from HU-treated yeast cells converted the slower migrating bands into a single, faster migrating band (Figure 1b) indicating that Sld3 is phosphorylated in an HU- and Rad53-dependent manner.
La frase si trova alla riga 10 di questo articolo:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2948544/ |
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Discussione |
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ritardo elettroforetico
Didattica
