Costruzione di un FLAG

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Discussione

kondalord
Nuovo Arrivato

Prov.: Bari
Città: altamura

68 Messaggi

Inserito il - 27 giugno 2012 : 20:04:24

sto preparando un esame di biochimica, e non mi è chiaro come si costruisce un FLAG:
visto che è una sequenza sintetica e non ci sono vettori già pronti si procede con la PCR: si compra un primer di circa 38 nt(20 per i primer e 18 per il Flag) e si avvia la PCR. Si usa l'orientamento del primer per avere una Flag al C-t o al N-t , da quel che ho capito:

il primer si costruisce con la sequenza flag al 5' del primer in modo che la proteina ottenuta da questo DNA avrà il FLAG all' N-t giusto?

ma se volgio il FLAG al C-t della proteina come devo costruire il primer?

SpemannOrganizer
Utente

Città: Los Angeles

955 Messaggi

Inserito il - 28 giugno 2012 : 16:32:50

metti la sequenza del Flag al reverse primer (ovviamente anche la sequenza del flag sarà reverse come il resto del reverse primer...).
Sul fatto che non ci siano vettori con flag è una bufala:
http://www.sigmaaldrich.com/life-science/molecular-biology/cloning-and-expression/vector-systems/mammalian-fag-expression-kits.html

e questo è solo un esempio, di vettori ce ne sono sicuramente una marea, tra commerciali e "home-made".

kondalord
Nuovo Arrivato

Prov.: Bari
Città: altamura

68 Messaggi

Inserito il - 28 giugno 2012 : 17:50:24

grazie 1000!