ciao ragazzi! mi sto cimentando con i western blotting. per vedere le bande nel mio laboratorio utilizziamo la chemiluminescenza. io incubo la membrana con la working solution e poi passo al chemidoc. mi chiedo...cosa succede lì dentro? grazie!
C'è una telecamera sensibile alla chemiluminescenza che quindi acquisisce il segnale in digitale. In sostanza è la stessa differenza che c'è per le foto su pellicola rispetto alle digitali.
la mia domanda nasceva dal fatto che in lab mi è stato detto che il tempo di esposizione al chemidoc influisce sul decadimento del segnale. a questo punto invece capisco che lo strumento fa una semplice acquisizione d'immagine, senza interagire in alcun modo con la membrana, giusto? e quindi il decadimento del segnale si ha proprio perché è una caratteristica delle reazioni chemiluminescenti..giusto? o ci sono altri fattori che devo considerare? grazie mille GFPina! scusa le mille domande..ma voglio capire bene come lavorare
Sì è come esporre una lastra, più tempo esponi e più forte sarà il segnale. Ma man mano che passa il tempo la chemiluminescenza decade, quindi se fai tante acquisizioni quella che fai dopo mezzora sarà più bassa rispetto alla prima perchè è passato tanto tempo, ma non dipende dal fatto che hai fatto delle esposizioni precedenti sarebbe uguale se tu tenessi la membrana al buio e la acquisissi dopo mezzora.