| Autore |
Discussione |
|
|
eimi
Nuovo Arrivato
Città: Modena
5 Messaggi |
 Inserito il - 28 settembre 2012 : 11:34:00
|
Ciao, sto tentando di amplificare un amplicone di 5000 bp. Finora, non sono riuscita a vedere la banda alla giusta altezza, ma solo a 3000 bp, tuttavia era già qualcosa. almeno vedevo una banda! Ora, cercando di ottimizzare la PCR, ho cambiato la Taq, la concentrazione del MgCl2....ecc...solo che ora ho un altro problema: i campioni di PCR non escono più dal pozzetto di caricamento, mentre il marker corre normalmente...
Il protocollo della pCR non l'ho modificato.
Il gel l'ho fatto allo 0,8% e poi anche allo 0,5%...più lasso di così non posso farlo!
Grazie per la vostra attenzione....spero mi sappiate dare una spiegazione...
|
|
|
|
|
Eltelin
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 29 settembre 2012 : 17:19:40
|
| il campo elettrico è corretto? |
 |
|
|
Lorydd
Nuovo Arrivato
17 Messaggi |
Inserito il - 30 settembre 2012 : 12:54:20
|
| Visto che con la prima PCR hai avuto un risultato..non è che hai disegnato male i primer e in realtà stai amplificando un frammento da 3000? hai provato ad inserirli su genome browser? |
|
|
|
eimi
Nuovo Arrivato
Città: Modena
5 Messaggi |
Inserito il - 06 ottobre 2012 : 19:30:23
|
@ Eltelin: sono sicura che il campo elettrico sia corretto perchè il marker è migrato correttamente.
@Lorydd: i primers li ho controllati ma ci riproverò nuovamente. Sto quasi pensando di disegnarne dei nuovi...
grazie a entrambe. |
|
|
|
zerhos
Utente Junior
Prov.: Pisa
Città: Pisa
421 Messaggi |
Inserito il - 09 ottobre 2012 : 16:20:26
|
Che stampo usi? Genomico, plasmide, cDNA?
Se fosse cDNA, è di un particolare tessuto? potrebbe essere un'isoforma della tua sequenza.
Inoltre la banda è pulita a 3kb o vedi dello smear? se vedi lo smear è possibile che dai troppo poco tempo di elongation. Che taq usi? |
"l'unica differenza tra me e un pazzo è che io non sono pazzo!"
Salvador.Dalì
|
|
|
| |
Discussione |
|
Il campione di PCR non migra nel gel
Didattica
