Western Blotting di proteine a basso PM

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Anton86
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Inserito il - 24 ottobre 2012 : 21:11:01

Ciao a tutti,
negli ultimi tempi ho una serie di problemi con WB di proteine a basso PM. Lavoro su istoni e quindi estraggo le proteine nucleari da quelle citoplasmitiche utilizzando una serie di soluzioni a concentrazione salina differente. Quantifico le mie proteine e carico in SDSpage, su gel di poliacr al 14%, 3 gamma di proteine nucleari. Post trasferimento, quando coloro la membrana con Red Ponceau mi accorgo che le proteine a basso PM hanno una strana morfologia rispetto a quelle a pi� alto PM che invece corrono e vengon trasferite benissimo. Mi spiego meglio.. le mie bande a 17Kda-10Kda hanno il tipico aspetto di un elettrocardiogramma. Ho provato a cambiare le mie soluzioni e controllo il pH rigorosamente (mi riferisco al Tris 1,5M e 0,5M a pH6.8). Ho provato a cambiare le condizioni di running e blotting (run:70V; blotting 70V per 1 ora e mezza) ma la situazione non � cambiata.
� mai successo a qualcuno di voi la stessa cosa? avete consigli e/o suggerimenti da darmi.
Vi ringrazio in anticipo.