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martolina86
Nuovo Arrivato
Prov.: Pisa
Città: Calci
83 Messaggi |
 Inserito il - 07 novembre 2012 : 15:21:58
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Ragazzi, non ho ben capito questo esercizio,mi aiutate?
Immagine:
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Ok, io non ho capito se con la ARMS , in presenza di mutazione,mi si visualizzano le bande o non mi si visualizzano nella corsa. Ad esempio: l'individuo 1: vedo che per la mutazione G551D ha una banda, visualizzata per l'allele N (ho interpretato così l'esercizio,ma non so se è giusto!): quindi significa che....?E' portatore o no di quella mutazione?E' omo o eterozigote?
Grazie a chi mi aiuterà!Credo che già ci fosse da qualche parte questo stesso esercizio ma non riesco più a trovarlo!
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
 Inserito il - 09 novembre 2012 : 01:30:11
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Non so bene cosa vogliano dire M e N (forse stanno per Normale e Mutato?)
Comunque in generale come in tutte le analisi di questo tipo:
- 1 banda = omozigote (a secondo di quale delle due bande hai sai per quale allele è omozigote)
- 2 bande = eterozigote
Quindi ad es. l'individuo 1 è omogigote per tutte e 4 le mutazioni considerate. L'individuo 2 invece ad es. è etrozigote per la quarta...
ora bisogna capire se gli omozigoti sono omo per l'allele mutato o per quello normale...
bisognrebbe sapere meglio cosa vi è stato detto a lezione, io posso solo supporre che "N" e "M" sotto a "(b)" stiano a significare l'allele Normale o Mutato amplificato nella PCR b, quindi ad es.
l'individuo 1 ha una banda in "b" per la prima mutazione e ti dice che "b" per quella mutazione è "N", quindi sarà normale per quella mutazione
poi ha una banda in "a" per la seconda mutazione, siccome ti dice che in questo caso "b" è "M", allora "a" è Normale, quindi l'individuo sarà "normale" per questa mutazione... ecc... |
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martolina86
Nuovo Arrivato
Prov.: Pisa
Città: Calci
83 Messaggi |
Inserito il - 09 novembre 2012 : 11:57:05
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| Grazie GFPina!Io non ho seguito con questa prof-.-' seguii con un'altra che NON faceva fare esercizi!Ad ogni modo io durante l'esame le ho chiesto: ma N e M sono i due alleli?Lei: sì!Stop....non mi ha detto altro: di grande aiuto direi-.-' Comunque, l'ho sbagliato=( Io ho scritto che la presenza della banda significasse mutazione,e che,essendo l'analisi per FIbrosi Cistica (l'ho dedotto dalle varie mutazioni esaminate), l'individuo 1 è sano perchè è eterozigote,ovvero presenta mutazione sull'allele b(N) perchè c'è una banda e non ha mutazione sull'allele a (M) perchè non c'è nessuna banda! ps: l'immagine l'ho tagliata male: non ho messo il significato di (a) che si può dedurre però dalle (b) che ho riportato! |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 09 novembre 2012 : 12:13:23
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No aspetta fammi capire...
nell'immagine ci doveva essere anche (a) e c'erano scritti gli alleli, che erano quindi opposti a (b) (cioè dove in (b) c'è M in (a) c'è N e viceversa?)
Credo che la mia interpretazione di M = mutato e N = normale, sia giusta.
Comunque il generale, quando fai una ARMS fai due reazioni di PCR distinte, una utilizzando primers che riconoscono "solo" l'allele normale (PCR 1) e una primers che riconoscono "solo" l'allele mutato (PCR 2). Poi semini su gel le due PCR e vedi la presenza delle bande:
- banda solo nella PCR 1: omozigote normale
- banda solo nella PCR 2: omozigote mutato
- bande in entrambe le PCR: eterozigote
questo per un singolo gene, o meglio una singola mutazione del gene.
Puoi poi fare una PCR multiplex in cui metti più primers che riconoscono diverse mutazioni, quindi su gel vedi più bande (ad altezze diverse ovviamente) che ti dicono per ogni mutazione che allele hai. Anche in questo caso ovviamente sono due set di PCR diverse e li vedi in parallelo.
Ovviamente sarebbe più semplice se avessi tutti i primers per gli alleli normali in A e tutti i primers per gli alleli mutati in B, ma in questo caso non è così, sono mischiati, comunque hai la tabella che ti dice cosa sono.
Spero sia chiaro ora!  |
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FC e tecnica ARMS.Esercizio corsa elettroforetica
