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edoardodp
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
 Inserito il - 19 dicembre 2012 : 12:18:39
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ciao a tutti,
volevo chiedere un consiglio per allestire una colonna cromatografica.
di quanta resina ho bisogno? ho trovato il prodotto online(Cyanogen bromide-activated-Sepharose® 4B) ma non so quanto comprarne..ho visto che le aliquote sono da 1grammo, 5grammi e 15 grammi...considerando che costa non poco volevo sapere se qualcuno sa il volume giusto per una colonna cromatografica e quanto rende 1 grammo di sefarosio(cioč quanti ml di gel vengono una volta risospeso)
spero di essere stato abbastanza chiaro! :)
grazie a tutti
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lą
Utente Junior
565 Messaggi |
Inserito il - 19 dicembre 2012 : 13:32:13
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| ciao! ma non fai prima a comprare la colonna? Mi spiego. Io faccio spesso cromatografie per affinitą e di solito compro le colonne da 1 ml gią impaccate (in una scatola te ne danno 5) e funzionano molto bene! |
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GFPina
Moderatore
Cittą: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 19 dicembre 2012 : 15:58:23
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Un grammo di sefarosio sono circa 4ml di gel.
La capacitą di legame di 1ml di gel č di 30-40mg di proteina.
Io uso questo della sigma: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/c9142
che pensi sia lo stesso che hai visto tu.
Comunque per tutte le informazioni basta che leggi il datasheet del prodotto: http://www.sigmaaldrich.com/etc/medialib/docs/Sigma/Product_Information_Sheet/c9142pis.Par.0001.File.tmp/c9142pis.pdf
Citazione:
Messaggio inserito da lą
ciao! ma non fai prima a comprare la colonna? Mi spiego. Io faccio spesso cromatografie per affinitą e di solito compro le colonne da 1 ml gią impaccate (in una scatola te ne danno 5) e funzionano molto bene!
Beh a parte il fatto dei costi e il fatto che se te le fai da sola puoi farti colonne di diverse dimensioni a secondo delle esigenze.
Ma se compri colonne gią impaccate come fai a coniugarci la tua proteina? |
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AleXo
Moderatore
Prov.: Estero
Cittą: San Francisco, California
1550 Messaggi |
Inserito il - 19 dicembre 2012 : 18:10:03
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| ci sono hitrap o similari pre attivate con tipo NHS per coniugare proteine, molto comode! sopratutto se ci lavori su fplc |
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AleXo
Moderatore
Prov.: Estero
Cittą: San Francisco, California
1550 Messaggi |
Inserito il - 19 dicembre 2012 : 18:12:40
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| fra l'altro rispetto alla resina costano relativamente poco (1x5ml o 5x1ml per ~250$). Ovvio la resina e' + flessibile, dipende da cosa vuoi fare. Io di solito prendevo quella hi density della defunta pharmacia (non ricordo come si chiami ora - scatolino bianco, scritte nere)da 5gm... 1 grammo per 5ml circa slurry. |
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GFPina
Moderatore
Cittą: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 19 dicembre 2012 : 19:41:33
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Citazione:
Messaggio inserito da AleXo
ci sono hitrap o similari pre attivate con tipo NHS per coniugare proteine, molto comode! sopratutto se ci lavori su fplc
Ah pensa, le HiTrap NHS-Activated HP proprio mi mancavano! 
Sempre usato la resina, che comunque č pił flessibile.
Per quanto riguarda il prezzo, beh da un rapido calcolo a paritą di ml costano circa 6,5 volte di pił, non proprio pochissimo (soprattutto per i budget italiani!)
La pharmacia comunque č diventata GE-HealthCare, che č la stessa delle HiTrap! |
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edoardodp
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
Inserito il - 21 dicembre 2012 : 11:53:02
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grazie a tutti per le risposte!!questo forum č spettacolare!! |
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lą
Utente Junior
565 Messaggi |
Inserito il - 27 dicembre 2012 : 13:49:07
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nel mio laboratorio purifichiamo molte proteine e di solito usiamo le pre-impaccate perchč molto comode per l'FPLC appunto, e per le cromatografie per affinitą. Inoltre le puoi riutilizzare, basta sottoporle a dei lavaggi con tamponi indicati.
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cromatografia per affinitą.quantitą di sefarosio
Didattica
