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maross
Nuovo Arrivato
18 Messaggi |
 Inserito il - 20 dicembre 2012 : 22:22:15
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Salve a tutti. A breve dovrebbe arrivarmi un costrutto plasmidico che dovrò amplificare. A quanto pare sarà di grandi dimensioni (oltre 10Kb)...io non ho mai fatto amplificazioni e mi stavo leggendo un po' di protocolli. Secondo alcuni la questione si complica all'aumentare delle dimensioni del plasmide e per plasmidi grandi l'esito di riuscita potrebbe essere fortemente ridotto. Mi chiedevo: potete darmi consigli in merito? Qualcosa che si può fare per ottimizzare la riuscita della trasformazione e quindi la resa?
Grazie :)
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edoardodp
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
Inserito il - 21 dicembre 2012 : 12:10:35
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| che plasmide è? come si chiama? devi solo amplificare o fare anche un'espressione e purificazione proteica? |
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maross
Nuovo Arrivato
18 Messaggi |
Inserito il - 21 dicembre 2012 : 19:10:58
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| ancora non so in che plasmide abbiano inserito il gene, comunque sicuramente un plasmide d'espressione. Io in pratica dovrò amplificarlo e poi utilizzarlo per trasfettare (non stabilmente) delle cellule in linea e no, non ho necessità di purificare il prodotto proteico. |
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zerhos
Utente Junior
Prov.: Pisa
Città: Pisa
421 Messaggi |
Inserito il - 21 dicembre 2012 : 20:24:50
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Vai tranquillo, 10-12 kb di grandezza non sono affatto problematici.
Io lavoro quotidianamente con plasmidi di 15kb e non ho mai avuto grossi problemi. Come ceppo di amplificazione uso le Dh5-alfa.
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"l'unica differenza tra me e un pazzo è che io non sono pazzo!"
Salvador.Dalì
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maross
Nuovo Arrivato
18 Messaggi |
Inserito il - 22 dicembre 2012 : 09:10:27
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Citazione:
Messaggio inserito da zerhos
Vai tranquillo, 10-12 kb di grandezza non sono affatto problematici.
Io lavoro quotidianamente con plasmidi di 15kb e non ho mai avuto grossi problemi. Come ceppo di amplificazione uso le Dh5-alfa.
lo stesso ceppo che hanno qui. Ma tu per quanto tempo le lasci in stufa (per la formazione delle colonie) e a che temperatura? |
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amplificazione DNA
Didattica
