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Autore Discussione  

maross
Nuovo Arrivato



18 Messaggi
Inserito il - 20 dicembre 2012 : 22:22:15  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di maross Invia a maross un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti. A breve dovrebbe arrivarmi un costrutto plasmidico che dovrò amplificare. A quanto pare sarà di grandi dimensioni (oltre 10Kb)...io non ho mai fatto amplificazioni e mi stavo leggendo un po' di protocolli. Secondo alcuni la questione si complica all'aumentare delle dimensioni del plasmide e per plasmidi grandi l'esito di riuscita potrebbe essere fortemente ridotto. Mi chiedevo: potete darmi consigli in merito? Qualcosa che si può fare per ottimizzare la riuscita della trasformazione e quindi la resa?
Grazie :)

edoardodp
Nuovo Arrivato




11 Messaggi
Inserito il - 21 dicembre 2012 : 12:10:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di edoardodp Invia a edoardodp un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
che plasmide è? come si chiama? devi solo amplificare o fare anche un'espressione e purificazione proteica?
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maross
Nuovo Arrivato



18 Messaggi
Inserito il - 21 dicembre 2012 : 19:10:58  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di maross Invia a maross un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ancora non so in che plasmide abbiano inserito il gene, comunque sicuramente un plasmide d'espressione. Io in pratica dovrò amplificarlo e poi utilizzarlo per trasfettare (non stabilmente) delle cellule in linea e no, non ho necessità di purificare il prodotto proteico.
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zerhos
Utente Junior

ZERHOS

Prov.: Pisa
Città: Pisa


421 Messaggi
Inserito il - 21 dicembre 2012 : 20:24:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di zerhos  Invia a zerhos un messaggio ICQ Invia a zerhos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Vai tranquillo, 10-12 kb di grandezza non sono affatto problematici.
Io lavoro quotidianamente con plasmidi di 15kb e non ho mai avuto grossi problemi. Come ceppo di amplificazione uso le Dh5-alfa.
"l'unica differenza tra me e un pazzo è che io non sono pazzo!"
Salvador.Dalì
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maross
Nuovo Arrivato



18 Messaggi
Inserito il - 22 dicembre 2012 : 09:10:27  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di maross Invia a maross un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da zerhos

Vai tranquillo, 10-12 kb di grandezza non sono affatto problematici.
Io lavoro quotidianamente con plasmidi di 15kb e non ho mai avuto grossi problemi. Come ceppo di amplificazione uso le Dh5-alfa.



lo stesso ceppo che hanno qui. Ma tu per quanto tempo le lasci in stufa (per la formazione delle colonie) e a che temperatura?
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