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pabla amelia
Nuovo Arrivato

9 Messaggi

Inserito il - 03 gennaio 2013 : 14:19:09

buongiorno sono alle prese con la rapd-pcr. volevo chiedere se cortesemente qualcuno poteva spiegarmi come posso calcolarmi il volume iniziale dei vari reagenti della pcr conoscendo il volume finale (25 microlitri) la concentrazione iniziale e quella finale.per esempio:

buffer taq-polimerasi C.iniziale = 10X e C.finale 1X
MgCl2 C.iniziale = 50 mM e C.finale = 2 mM
dNTP C.iniziale = 2 mM e C.finale =0,2 mM
m13 primer C.iniziale = 2 micromoli e C.finale = 0,66 micromoli
taq polimerasi C.iniziale = 1U/microlitro e Cfinale = 1U
dna lo conosco gi�

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 03 gennaio 2013 : 14:34:37

Dai una lettura a queste pagine: http://www.molecularlab.it/principi/calcoli-laboratorio/

Ad ogni modo, prendiamo ad es. i dNTP (poi il discorso � uguale per il resto).

Hai uno stock 2mM e alla fine vuoi 0.2 mM. Vuol dire che dovrai diluire 10 volte il tuo stock. Se il volume finale � di 25 ul vuol dire che 1/10 di questo volume, ossia 2.5 ul saranno di dNTP.

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pabla amelia
Nuovo Arrivato

9 Messaggi

Inserito il - 03 gennaio 2013 : 14:46:37

ok fin qui ci sono....ma per la taq-polimerasi come faccio a calcolarla?per esempio qua mi dice che avendo un concentrazione iniziale di 5U/ul e una concentrazione finale di 1U avendo sempre il volume finale di 25 ul come faccio a trovarmi il volume iniziale?

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 03 gennaio 2013 : 15:43:51

Perch� vuoi sapere il volume iniziale?

Il ragionamento � lo stesso che siano mM (cio� mmol/l) oppure U/ul.

Hai 5U/ul e vuoi avere 1U/ul diluirai 5 volte.

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pabla amelia
Nuovo Arrivato

9 Messaggi

Inserito il - 03 gennaio 2013 : 15:58:16

NO LA TAQ-POLIMERASI SI CALCOLA DIVERSAMENTE. SECONDO LA SPIEGAZIONE DEL PROF. IL VOLUME INIZIALE SI TROVA CON QUESTA PROPORZIONE:
5U:1ul = 1U:xul

x ul = 1U x 1ul/5U che mi d� 0,2 ul

Giuliano652
Moderatore

Prov.: Brescia

6941 Messaggi

Inserito il - 03 gennaio 2013 : 16:31:18

Citazione:
Messaggio inserito da pabla amelia

x ul = 1U x 1ul/5U che mi d� 0,2 ul

e non � un quinto dell'iniziale, come ti diceva Chick80?

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pabla amelia
Nuovo Arrivato

9 Messaggi

Inserito il - 03 gennaio 2013 : 17:39:36

si non avevo letto bene....ora l'ho capito graziee

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