metodologia del doppio ibrido

Forum

Registrati Discussioni Recenti Preferiti Utenti Cerca Regolamento RSS Statistiche

Utilità

I libri
consigliati:

Metodi statistici per la sperimentazione biologica
Autori Vari

Il gene VI
Benjamin Lewin

Genoma. L'autobiografia di una specie in ventitre capitoli
Matt Ridley

Altri Libri

Nome Utente:	Password:
Riconoscimi automaticamente

Tutti i Forum

MolecularLab

Biologia Molecolare

metodologia del doppio ibrido

Nuova Discussione

Nuovo Sondaggio

Rispondi

Aggiungi ai Preferiti

Cerca nelle discussioni

Risorse di Biologia Molecolare:

Didattica

Blog Inside the Cell

Protocolli

Siti di Biologia Molecolare e Tecniche

Quiz

Ultime notizie

Aggiungi i tag

Quanto � utile/interessante questa discussione:

Autore

Discussione

mariolini
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 13 settembre 2004 : 21:27:14

Ciao,sono una studentessa napoletana CTF.Devo fare a breve l'same di biochimica applicata ed ho qualche difficolta'.Qualcuno potrebbe mandarmi informazioni sul procedimento della metodologia del doppio ibrido? Grazie

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 14 settembre 2004 : 18:50:34

In breve la tecnica dei due ibridi ti consente di studiare l'interazione fra due proteine.
Essenzialmente si sfrutta il fatto che la proteina Gal4 � costituita da due domains, uno che lega il DNA ed uno catalitico che promuove la trascrizione del gene a valle del sito di legame di Gal4.
Se tu dividi il gene di Gal4 in due parti, in modo da separare le due attivit� e fondi ciascuna di queste con una delle 2 proteine che stai studiando, ottieni qualcosa di questo tipo:

-----Gal4BD-Prot1---- ------Prot2-Gal4AD----

dove Gal4BD � il binding domain che lega il DNA e Gal4AD � l'activation domain che promuove la trascrizione.
Ovviamente la fusione deve essere fatta in frame, in modo che le proteine conservino (in massima parte) la struttura originale.

Ora, se tu metti questi 2 costrutti in un plasmide e trasfetti una cellula con questo plasmide e con un altro plasmide contenente un gene reporter (Lux, GFP o quello che vuoi tu) sotto il controllo di un promotore Gal, potrai avere 2 situazioni:

1) La proteina 1 lega la proteina 2:


         Prot1::Prot2
         |        \
      Gal4BD       Gal4AD -----> Il gene viene trascritto
----GAL4 prom.---GENE---

2) Le due proteine non si legano


                           Gal4AD
                          /
         Prot1         Prot2 
         |        
      Gal4BD           --XX->  Il gene non viene trascritto
----GAL4 prom.---GENE---

Dopo questo meraviglioso esempio di ASCII-art (

)... ti saluto!
Spero di essermi spiegato chiaramente, in caso contrario chiedi pure, siamo qui apposta!

bye
nICO

Sei un nuovo arrivato?
Leggi il regolamento del forum e presentati qui

My photo portfolio (now on G+!)

mariolini
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 15 settembre 2004 : 15:31:34

Grazie � stato utilissimo!!!!A questo punto potresti mandarmi qualcosa sulla OLA- PCR....

Rando
Nuovo Arrivato

Prov.: Lodi

17 Messaggi

Inserito il - 15 settembre 2004 : 18:31:43

Per la OLA-PCR ti rimando ad un sito inglese che spiega brevemente la metodica: http://www.mhhe.com/biosci/cellmicro/hartwell/ola.mhtml

e ad un sito italiano che fa vedere un'applicazione di diagnostica clinica
http://www.laboratoriogenoma.it/prestazioni_sottocategoria.asp?IdCat=18&IdSubCat=26

nulla a che vedere con la grande chiarezza di nICO cmq...

ciao
rando

princess90
Nuovo Arrivato

1 Messaggi

Inserito il - 28 maggio 2012 : 16:40:24

ciaooo.... qualcuno di buon cuore pu� spiegarmi il doppio ibrido in lievito che non riesco a capirci tanto ??? grazie mille a tutti!!!!!

0barra1
Utente Senior

Citt�: Paris, VII�me arrondissement

3847 Messaggi

Inserito il - 28 maggio 2012 : 17:38:38

Leggi il messaggio di chick nello stesso topic in cui ci troviamo.
Se ancora non ti trovi, chiedi ulteriori ragguagli.

So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss