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mq
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Inserito il - 08 febbraio 2007 : 18:50:56  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mq Invia a mq un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao ragazzi! Non riesco a capire bene come calcolare il rapporto tra frammento da ligare e plasmide. Ad esempio se ho un frammento di 800bp da ligare in un plasmide di 5000 bp, il rapporto molare sarà di circa 1:6. Ed il rapporto tra ng frammento:ng plasmide? Nella reazione di ligazione i ng di frammento devono essere maggiori di quelli del plasmide. Come si calcolano? Poniamo che io voglia usare 25ng di plasmide..quanti ne devo aggiungere di frammento? Aiuto..non ci capisco nulla!!! Grazie!!!
Miki

Michi

valia
Moderatore


Prov.: UK


1001 Messaggi

Inserito il - 08 febbraio 2007 : 19:05:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di valia  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di valia Invia a valia un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Se metti lo stesso PESO di plasmide ed inserto, in questo caso il numero di molecole di inserto sara' 6 volte maggiore del numero di molecole di plasmide, perche l'inserto e' 6 volte piu leggero del plasmide.

Ora, sta a te decidere quanto piu' inserto vuoi (in termini di numero di molecole)..
Poniamo che tu voglia 10 volte piu' inserto, no?
Allora io metterei 25ng di plasmide e una cinquantina di inserto (il doppio).. In questo modo hai circa 12 volte piu' inserto!



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mq
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7 Messaggi

Inserito il - 08 febbraio 2007 : 19:47:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mq Invia a mq un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da valia

Se metti lo stesso PESO di plasmide ed inserto, in questo caso il numero di molecole di inserto sara' 6 volte maggiore del numero di molecole di plasmide, perche l'inserto e' 6 volte piu leggero del plasmide.

Ora, sta a te decidere quanto piu' inserto vuoi (in termini di numero di molecole)..
Poniamo che tu voglia 10 volte piu' inserto, no?
Allora io metterei 25ng di plasmide e una cinquantina di inserto (il doppio).. In questo modo hai circa 12 volte piu' inserto!

Grazie mille! Adesso si che ho capito!!




Michi
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