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Armida
Nuovo Arrivato
88 Messaggi |
 Inserito il - 17 maggio 2013 : 22:14:50
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Perchè nei geni codificanti per proteine ricombinanti (es. insulina) vengono inseriti i promotori? Specificamente qual'è la loro funzione?
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EROTAVLAS
Nuovo Arrivato
16 Messaggi |
Inserito il - 18 maggio 2013 : 01:54:32
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| Quando si vuole fare espressione eterologa, in E.Coli ad esempio, di proteine ricombinanti si intende ottenere la maggiore quantità possibile di proteina. L'obiettivo può essere raggiunto utilizzando dei ceppi ottimizzati per l'espressione che contengono nel loro genoma il gene codificante per la T7 Rna Pol, derivata dal fago T7, sotto il controllo di un promotore, solitamente lacUV5 inducibile con lattosio o IPTG. Si trasforma questo ceppo con un vettore contenente la sequenza della proteina che vogliamo esprimere, sotto il controllo di un promotore per la T7 Rna Pol. Quindi quando noi induciamo la nostra coltura, indurremo l'espressione della RNa pol che a sua volta si andrà a legare al suo promotore sul vettore trascrivendo l' mRNA della nostra proteina. Più e forte il promotore maggiore sarà l'espressione della proteina. |
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Armida
Nuovo Arrivato
88 Messaggi |
Inserito il - 18 maggio 2013 : 08:21:39
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Grazie ma il mio dubbio persiste  |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 18 maggio 2013 : 09:21:13
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La funzione del promotore è quella di (come dice il nome) promuovere la trascrizione di un gene. Se non metti il promotore (e in generale delle sequenze upstream) non avrai trascrizione. Conta che i promotori ci sono anche nei geni naturali, non sono una cosa specifica dei geni ricombinanti.
Poi, in genere, si usano promotori virali come ad es. T7, perchè sono promotori forti, cioè ti fanno trascrivere il gene in quantità molto elevata, quindi ti permettono di produrre una grande quantità di proteina. |
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