Precipitazione RNA con acetato di ammonio

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germy
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74 Messaggi

Inserito il - 03 luglio 2013 : 09:42:50

Buongiorno a tutti,
ho un piccolo problema che mi sta facendo perdere la testa.
Ho bisogno di isolare dei piccoli rna (tra 100-300pb) a partire da una trascrizione in vitro.
Ho evitato di utilizzare i normali kit con colonnine in quanto si tratta di rna troppo piccoli e se ne perderebbero molti, quindi ho optato per la precipitazione con acetato d'ammonio e quindi poi i vari passaggi con etanolo.
Ora il problema � che una volta risospeso l'rna in acqua la misurazione al Nanodrop mi d� concentrazioni altissime, anche 1ug ma quando vado a effettuare la corsa su gel d'agarosio 2% la banda non � assolutamente concentrata come predetto dal nanodrop!
E' possibile che i sali che si vengono a creare con la precipitazione possano interferire con l'analisi del nanodrop? Il problema � che ho bisogno di concentrazioni esatte per procedere con i miei esperimenti.
A voi � mai capitata una cosa del genere? E se si come avete risolto?

Grazie e buona giornata! ;)