Espressione ormone della crescita in PET-22b

Forum

Registrati Discussioni Recenti Preferiti Utenti Cerca Regolamento RSS Statistiche

Utilità

I libri
consigliati:

Genetica molecolare
Rolf Knippers

Biologia dello sviluppo
Scott F. Gilbert

Filosofia della scienza
Giovanni Boniolo, Paolo Vidali

Altri Libri

Nome Utente:	Password:
Riconoscimi automaticamente

Tutti i Forum

MolecularLab

Biologia Molecolare

Espressione ormone della crescita in PET-22b

Nuova Discussione

Nuovo Sondaggio

Rispondi

Aggiungi ai Preferiti

Cerca nelle discussioni

Risorse di Biologia Molecolare:

Didattica

Blog Inside the Cell

Protocolli

Siti di Biologia Molecolare e Tecniche

Quiz

Ultime notizie

Aggiungi i tag

Quanto � utile/interessante questa discussione:

Autore

Discussione

Giulisoft
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 09 luglio 2013 : 11:32:33

Salve a tutti, premetto sono nuova del forum, ho fatto una ricerchina rapida ma mi pare di non aver trovato la risposta alla mia domanda. Stiamo preparando per un esame di biologia applicata una strategia di clonaggio di un gene, io ho scelto GH e come vettore di clonaggio il plasmide della Novagen pEt-22b. Ora, correggetemi se sbaglio, io cerco la mia sequenza su NCBI e individuo la sequenza del mio peptide maturo, perch� nella sequenza CDS c'� anche la sequenza segnale che in E.Coli che ospita quel plasmide non mi serve, perch� voglio fondere il mio gene con la sequenza leader Pelb che mi porter� la proteina nel periplasma dove ricever� alcune modifiche post traduzionali. Il problema � che con qualsiasi enzima di restrizione definito dal mio plasmide io utilizzi non viene assolutamente mantenuta l'ORF! Alcuni compagni hanno risolto inserendo un "GC" in modo da ottenere un codone codificante per la glicina (nella figura allegata, ha inserito gli ultimi due GC in grassetto in modo da ottenere la sequenza della glicina cerchiata in rosso) che � piccola e non da fastidio, ma a me sembra una cazzata aggiungere aa a caso per mantenere l'ORF, non so...consigli? Qualcuno esperto in materia? Premetto che la preparazione di biologia molecolare che abbiamo si riduce ad un esamino dato in triennale, e noi siamo in magistrale -.- Scusate per la lungaggine del messaggio, grazie!

Immagine:

21,18 KB