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Excelinthewall
Nuovo Arrivato
15 Messaggi |
 Inserito il - 11 febbraio 2014 : 14:07:34
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Salve ragazzi!
torno qui a chiedere nuovamente consiglio!
dovevo fare un kit ELISA anti BDNF su lisati ippocampali di topo. Ma il kit era scaduto e sopratutto, per campione, avrei dovuto usare 30 mg di tessuto e quindi se ne sarebbe andato metā ippocampo. Alchč, ho pensato che dato che l'anticorpo II č coniugato HRP e quindi possibile da vedere con tecnica WB con ECL amersham, ho deciso di provare.
Ho bloccato delle mie precedenti membrane giā corse e blottate (a 23', 15V) con albumina al 2.5% T TBS 0.1%, RT per 1h. incubato il primario proveniente dal kit (1:200 in BSA 2,5% T TBS 0.1%) over night a +4°C. il giorno dopo ho usato la concentrazione di secondario indicata nel kit (1:500 in BSA 2.5& T TBS 0.1%) e ho sviluppato. la prima membrana č venuta perfetta, pareva un ponceau. ma mano a mano le lastre hanno incominciato a venire poco e oggi sono arrivata a 1 ora di esposizione. Cosa mi consigliate? aumento il ab II? qualcuno ha avuto la mia stessa esperienza?
Grazie mille ;)
Silvia
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anticorpo I e II anti BDNF per ELISA usati in Western Blot
Didattica
