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fede.89
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11 Messaggi

Inserito il - 13 maggio 2014 : 20:38:58

buonasera,
ho un problema con un paper del quale devo fare una presentazione... vi riassumo il problema:
un vettore contenente la cassetta CaMV35s-gene-nosT viene tagliato con due enzimi di restrizione. E fin qui tutto ok.
-problema 1: viene tagliato con EcoRI che dovrebbe tagliare nel 35s circa 80bp a monte del 3' ma in NCBI la sequenza del 35s che trovo non contiene quoto sito. Credo che quella in un vettore sia ingegnerizzata e quindi non proprio il 35s originale; qualcuno mi sa dire dove trovarla?
dopo il taglio il frammento viene clonato il pGFP, il 35s viene ricomplementato e poi la cassetta viene prelevata nuovamente.
-problema 2: pGFP non ha un 35s (o meglio quello standard no)
-Problema 3: che è anche il più importante... perché fare tutto ciò? se ho già la cassetta di espressione completa perché devo fare un passaggio in un vettore temporaneo? soprattutto considerando che poi la cassetta viene inserita in un vettore di espressione in pianta con un clonaggio non direzionale blunt-blunt

grazie mille a tutti quelli che avranno voglia di leggere il mio papiro =) =)