vettore L4440

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trudi87
Nuovo Arrivato

Citt�: Napoli

6 Messaggi

Inserito il - 09 luglio 2014 : 14:40:55

Ciao ragazzi,
conoscete il vettore L4440? Serve per produrre dsRNA in batteri grazie alla presenza di due promotori convergenti. Solitamente si trasforma il ceppo di E.coli HT115 poich� � privo di RNasi, ma vorrei sapere se secondo voi per ottenere grandi quantit� di questo vettore posso trasformare le TOP10.
grazie mille

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 10 luglio 2014 : 17:29:38

S� certo, anzi DEVI amplificarlo in un clone che non abbia la T7 polimerasi e che quindi non possa esprimere il tuo costrutto, come appunto TOP10 o DH5-alfa. (ce ne sono anche tanti altri)

trudi87
Nuovo Arrivato

Citt�: Napoli

6 Messaggi

Inserito il - 11 luglio 2014 : 13:48:06

Grazie GFPina! alla fine ho dovuto usare il ceppo JM109. In realt� ho trasformato le cellule col vettore supercoiled senza inserto per conservarmi le cellule contenenti il vettore. Purtroppo adesso ho delle difficolt� sullo screening delle colonie trasformate poich� sia il vettore che il ceppo hanno la resistenza all'ampicillina.

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 11 luglio 2014 : 15:22:41

S� le JM109 sono un altro classico ceppo usato per la propagazione dei plasmidi.

Comunque da quando sarebbero resistenti all'ampicillina?

Non mi risulta proprio!

GENOTIPO JM109: endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ Delta916;(lac-proAB) e14- [F' traD36 proAB+ lacIq lacZ#916;M15] hsdR17(rK-mK+)