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trudi87
Nuovo Arrivato
Città: Napoli
6 Messaggi |
 Inserito il - 09 luglio 2014 : 14:40:55
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Ciao ragazzi,
conoscete il vettore L4440? Serve per produrre dsRNA in batteri grazie alla presenza di due promotori convergenti. Solitamente si trasforma il ceppo di E.coli HT115 poichè è privo di RNasi, ma vorrei sapere se secondo voi per ottenere grandi quantità di questo vettore posso trasformare le TOP10.
grazie mille 
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 10 luglio 2014 : 17:29:38
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| Sì certo, anzi DEVI amplificarlo in un clone che non abbia la T7 polimerasi e che quindi non possa esprimere il tuo costrutto, come appunto TOP10 o DH5-alfa. (ce ne sono anche tanti altri) |
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trudi87
Nuovo Arrivato
Città: Napoli
6 Messaggi |
Inserito il - 11 luglio 2014 : 13:48:06
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Grazie GFPina! alla fine ho dovuto usare il ceppo JM109. In realtà ho trasformato le cellule col vettore supercoiled senza inserto per conservarmi le cellule contenenti il vettore. Purtroppo adesso ho delle difficoltà sullo screening delle colonie trasformate poichè sia il vettore che il ceppo hanno la resistenza all'ampicillina.
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 11 luglio 2014 : 15:22:41
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Sì le JM109 sono un altro classico ceppo usato per la propagazione dei plasmidi.
Comunque da quando sarebbero resistenti all'ampicillina?
Non mi risulta proprio!
GENOTIPO JM109: endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ Delta916;(lac-proAB) e14- [F' traD36 proAB+ lacIq lacZ#916;M15] hsdR17(rK-mK+) |
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vettore L4440
Didattica
