Quanto č utile/interessante questa discussione:
| Autore |
Discussione |
|
|
mony1207
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
 Inserito il - 27 dicembre 2014 : 17:32:21
|
Buonasera a tutti, mi chiamo Monica e sono nuova in questo forum. Avrei da chiedervi delle delucidazioni. Ho letto su internet sulle glp per la biologia molecolare e la pcr che per le diverse aree delle diverse fasi della pcr (preparazione della mix, estrazione del DNA, amplificazione) devono essere impiegate attrezzature dedicate a ciascuna area, onde evitare problemi di contaminazione.
Secondo voi, parlando di real time pcr eseguita in piastre da 96 pozzetti, per le fase di estrazione del DNA e la fase di aggiunta del DNA alla miscela di reazione della piastra a 96 pozzetti devo impiegare set differenti di pipette (seppure usando puntali con il filtro per ogni passaggio)?
Inoltre la piastra da 96 pozzetti, dopo l'aggiunta del DNA e precedentemente alla sua immissione nel termociclatore, puō essere centrifugata nella stessa centrifuga impiegata per estrarre il DNA (ovviamente dopo aver cambiato il rotore)? o bisogna avere due centrifughe separate?
Vi ringrazio per l'attenzione e ringrazio in anticipo chiunque voglia aiutarmi a far chiarezza! buon fine settimana e buone feste!!
|
|
|
|
|
picchiasebino
Nuovo Arrivato
Cittā: roma
52 Messaggi |
Inserito il - 09 gennaio 2015 : 17:00:37
|
Ciao. Per la prima domanda, l'ideale sarebbe avere zone diverse, uso di cappe per la preparazione della mix e per l'aggiunta del DNA, e set di pipette separate. Infatti che senso ha creare zone separate per l'estrazione del DNA e per la preparazione della mix se poi utilizzo pipette che sono utilizzate in entrambi gli ambienti? Infatti porterei una piastra preparata con tutti gli accorgimenti che viene a contatto con pipette contaminate. Ma in nessun caso si puā parlare di obbligo ma solo di raccomandazioni. Se si ha necessitā di ridurre le protezioni, la verifica preliminare e sistematica dell'assenza di contaminazioni dovrebbe essere testata.
Per la seconda domanda, la risposta č simile. Nel mio caso non utilizzo centrifughe diverse perchč ho verificato l'assenza di contaminazioni, dovute al fatto probabilmente che il film plastico di chiusura della piastra isoli completamente i pozzetti dall'esterno. |
 |
|
| |
Discussione |
|
|
|
Quanto č utile/interessante questa discussione:
| MolecularLab.it |
© 2003-18 MolecularLab.it |
|
|
|
condivisione strumentazioni nelle fasi di PCR
Didattica
