Problemi di Taq polimerasi

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romaux
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1 Messaggi

Inserito il - 29 gennaio 2015 : 09:49:09

Ciao a tutti.
Sono alle prese con l'utilizzo della Taq euroclone (con 5uL di buffer B:B a campione e 2,5mM dNTPs. Ogni volta che eseguo una pcr o una colony non ottengo nulla se non primer dimer visibili nel gel

.
Ripetendo con Taq promega l'amplificazione esce. Qualcuno riscontra gli stessi problemi con la Taq euroclone? Non esistono delle condizioni specifiche in cui farla funzionare? Addirittura in certi casi non ho ottenuto nememno amplificazione del controllo con Actina.
Grazie a tutti

sashiolina
Nuovo Arrivato

29 Messaggi

Inserito il - 29 gennaio 2015 : 13:45:17

usi l'@Taq dell'Euroclone? avevamo avuto anche noi problemi di amplificazione... usando le stesse condizioni, stessi primer etc e usando la GoTaq della Promega al posto di quella dell'Euroclone tutto si � risolto..
funziona meno... pu� essere questione anche di lotto... o di brevetti
Puoi allungare i tempi di amplificazione e abbassare le temperature di annealing e provare (ma non � detto che migliori, potresti avere dei problemi di specificit�)